| 2.1拮抗细菌对香蕉枯萎病菌的抑制作用
从不同香蕉根际土中分离得到细菌87株，通过与香蕉枯萎病菌的对峙培养4~5d后，共筛选出对香蕉枯萎病具有抑制作用的细菌7株，分别是：255、D5、F2、ZK11、214、215、252。在PDA平板实验中，这7株细菌能对香蕉枯萎病菌菌丝产生明显的抑菌作用，靠近拮抗菌一侧的菌丝生长速度变缓或停止，并产生明显的透明抑菌带，或者在抑菌带边缘产生绿色的色素。
表1拮抗细菌对香蕉枯萎病菌的平板抑制作用
Tab.1EffectofantagonisticbacteriaonmorphologyofFusariumoxysporumf.sp.cubense(FOC)
|
处理
Treatment
|
抑菌圈直径/mm
diameter of inhibitive zone/mm
|
平均值
Average/mm
|
差异显著性
different significance
|
|
Ⅰ
|
Ⅱ
|
Ⅲ
|
Ⅳ
|
0.05
|
0.01
|
|
255
|
24
|
20
|
22
|
21.5
|
22.88
|
ab*
|
AB
|
|
D5
|
19
|
18.5
|
18
|
20
|
18.00
|
c
|
BC
|
|
F2
|
20
|
23
|
24
|
22
|
22.25
|
a
|
A*
|
|
ZK11
|
22
|
23
|
20
|
21
|
21.50
|
ab
|
AB
|
|
214
|
22
|
20
|
19.5
|
20
|
20.37
|
bc
|
ABC
|
|
252
|
24
|
21
|
20.5
|
20
|
21.38
|
ab
|
AB
|
|
215
|
18
|
17.5
|
18.5
|
18
|
17.90
|
c
|
C
|
|
对照（NB）
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
d
|
D
|
*：同一列中不同字母表示在5%或1%水平存在显著性差异
*:Differentlettersinthesamecolumnrepresentsignificantdifferenceatlevelof5%or1%
2.2拮抗细菌对香蕉枯萎病菌菌丝的作用方式
在抑菌带交界处挑取部分菌丝块于显微镜下观察，被拮抗细菌抑制生长的菌丝主要出现3种不同形态（如图1）：拮抗菌D5能使病菌菌丝顶端产生泡囊，从而抑制菌丝的生长；拮抗菌252使病菌菌丝中产生透明气泡，使菌丝消融断裂；拮抗菌255、F2使病菌菌丝扭曲，菌丝体形成透明的不规则泡囊状，并且断裂散生。而正常生长的菌丝光滑均匀。
A.正常生长菌丝,B.经拮抗菌D5处理后的病菌菌丝形态;C.经拮抗菌255和F2处理后的病菌菌丝形态;D.经拮抗菌252处理后的病菌菌丝形态
A.normamyceliaum,B.hyphaeofFOCtreatedwithD5,C.hyphaeofFOCtreatedwith255andF2,D.hyphaeofFOCtreatedwith252.
图1拮抗细菌对香蕉枯萎病菌菌丝的作用(4×10倍)
Fig.1EffectofantagonisticbacteriaonmorphologyofFusariumoxysporumf.sp.cubense
2.3拮抗细菌对香蕉枯萎病菌孢子萌发的抑制作用
将拮抗菌的过滤发酵液与枯萎病菌的孢子悬浮液混合后滴于凹玻片中培养12h后观察，结果表明（表1），7种拮抗细菌的发酵液均能显著地抑制香蕉枯萎病菌孢子的萌发，拮抗菌株F2、214、252与拮抗菌株D5、ZK11、215之间对香蕉枯萎病菌孢子萌发抑制率在5%水平上存在显著差异。而且经拮抗菌液处理后萌发的孢子芽管明显短于对照NB培养液中的孢子萌发芽管，并能使萌发的孢子芽管产生畸形。
表2拮抗细菌对香蕉枯萎病菌孢子萌发的抑制作用
Tab.2InhibitionofantagonisticbacteriatosporesgerminationofFusariumoxysporumf.sp.cubense
|
处理
Treatment
|
孢子萌发率（%）
spores germination rate (%)
|
平均值
Average
|
差异显著性
Different significance
|
抑制率%
Inhibitive rate%
|
|
Ⅰ
|
Ⅱ
|
Ⅲ
|
Ⅳ
|
0.05
|
0.01
|
|
255
|
26.5
|
23.0
|
29.0
|
25.0
|
25.6
|
Cd*
|
BCD*
|
68.0
|
|
D5
|
30.5
|
39.0
|
38.5
|
29.5
|
34.4
|
bc
|
B
|
57.4
|
|
F2
|
14.0
|
22.5
|
20.5
|
21.0
|
19.1
|
d
|
D
|
75.9
|
|
214
|
18.5
|
26.0
|
29.5
|
12.5
|
21.8
|
d
|
CD
|
73.2
|
|
215
|
31.5
|
29.0
|
43.0
|
39.0
|
35.1
|
b
|
B
|
55.9
|
|
252
|
22.5
|
19.5
|
19.0
|
24.5
|
21.2
|
d
|
CD
|
73.5
|
|
ZK
|
31.0
|
23.0
|
40.5
|
34.5
|
32.2
|
bc
|
BC
|
60.1
|
|
CK (NB)
|
73.5
|
91.5
|
75.0
|
83.0
|
81.7
|
a
|
A
|
0.0
|
*：同一列中不同字母表示在5%或1%水平存在显著性差异
*:Differentlettersinthesamecolumnrepresentsignificantdifferenceatlevelof5%or1%
2.4拮抗细菌的鉴定
2.4.1拮抗菌株16SrDNA序列分析
利用细菌16SrRNA基因通用引物对3株抑菌作用不同的拮抗细菌菌株16SrDNA进行扩增，获得大约1.5kb的特异性条带。通过与NCBI数据库中的模式菌株16SrDNA序列进行相似性比较，结果显示，拮抗菌株255的16SrDNA序列长度为1462bp，与芽孢杆菌属（Bacillussp.）的序列相似度达到99%，与蜡状芽孢杆菌（Bacilluscereus）同源性达到99%，与苏云金芽孢杆菌同源性（Bacillusthuringiensis）达到98%；拮抗菌株D5的16SrDNA序列长度为1052bp，与芽孢杆菌属（Bacillussp.）相似度达到99%，与苏云金芽孢杆菌（Bacillusthuringiensis）的相似性达到99%，与蜡状芽孢杆菌（Bacilluscereus）同源性也达到99%；拮抗菌株F2的16SrDNA序列长度为1062bp，与芽孢杆菌属（Bacillussp.）的序列相似度达到99%，与地衣芽孢杆菌（Bacilluslicheniformis）、解淀粉芽孢杆菌（Bacillusamyloliquefaciens）、枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）的相似性达到99%。
2.4.2拮抗细菌的形态及生理生化特征
拮抗菌株F2在营养琼脂培养基上呈乳白色不透明，表面粗糙皱褶，菌体边缘不整齐。细菌菌体呈杆状，单生，菌体长度约为2~2.5μm，菌体直径小于1μm，可产生近中生的椭圆形芽孢，无伴孢晶体（图2-A）；革兰氏染色阳性，在含葡萄糖或甘露醇的培养基上产酸，淀粉水解呈阳性，能利用柠檬酸盐，吲哚试验呈阴性（表3）。 2/4 首页 上一页 1 2 3 4 下一页 尾页 |
