论文摘要：为培育耐碱的杂种砧木，以耐碱品种资阳香橙(Citrus junos Sieb. ex Tanaka)与不耐碱的枳(Poncirus trifoliata(L.) Raf.）杂交，将杂种F1群体经形态学与SSR鉴定杂种真实性，并通过叶片黄化程度分级、叶绿素与有效铁质量分数的测定以鉴定其耐碱能力，结果表明：1、以枳为父本时，与母本叶片形态上无明显差异的F1都是珠心苗。2、真实杂种苗从第10片叶开始都有三出复叶。3、筛选到2对SSR引物能鉴定出全部杂种苗。4、在碱性土上，耐碱杂种苗叶绿素cha+b的质量分数显著低于耐碱亲本资阳香橙，而极显著高于不耐碱亲本枳；但叶绿素a的质量分数显著高于父母本。5、耐碱杂种叶片有效铁质量分数显著高于枳。结论：获得了2株耐碱能力较强的真实杂种苗。
论文关键词：柑橘,砧木,杂种鉴定,耐碱,鉴定
砧木品种改良对支撑柑橘产业发展至关重要。近年国外育种者报道了一些柑橘砧木育种的研究，多采用了起源于中国的枳作为杂交亲本。
枳(Poncirustrifoliata(L.)Raf.）原产于我国，是我国广泛使用的传统砧木。但枳不抗裂皮病和碎叶病，对碱性土极为敏感，在碱性土上极易表现叶片缺铁黄化症状，与柚类或低酸甜橙的某些品种嫁接不亲和。
资阳香橙(CitrusjunosSieb.exTanaka)是我国特有的、耐碱能力强的优良柑橘砧木品种。资阳香橙能适应pPH值7.2-8.4的碱性紫色土，耐裂皮病和碎叶病，树体寿命长。其主要不足之处在于：实生苗幼苗较易感炭疽病；以资阳香橙作砧木的柑橘树，大小年与隔年结果现象更为明显（数据未发表）。
为获得综合资阳香橙与枳的优点的新型砧木品种，有必要将二者进行杂交。由于双亲都是多胚品种，杂交F1群体中含有较多的珠心苗。本试验通过形态学与分子生物学相结合进行了杂种真实性鉴定，并对真实杂种苗进行了耐碱性初步筛选。期望获得耐碱性较强的杂种苗。
1材料和方法
1.1材料
2008年以资阳香橙为母本，飞龙枳、普通枳、晚花枳为父本，进行杂交；2009年以资阳香橙为母本、旺苍大叶枳为父本杂交，同时以旺苍大叶枳为母本，资阳香橙为父本进行杂交；获得F1代群体。以该F1代群体作为供试材料。
1.2方法
1.2.1F1代群体的形态学鉴定
父本与母本形态学有三点明显差异，其一是：父本飞龙枳的枝条弯曲，枝刺呈倒钩状，与其他枳或柑橘类都不同。其二是：枳是冬季落叶的灌木或小乔木，而资阳香橙常绿。其三是：枳及其变种飞龙枳都是三叶，而资阳香橙为单叶。
参照加州大学早期研究结论：“枳的杂种苗在第2-8片叶都有三叶。”在实生苗第8片叶展叶时，按叶片形态学特征将全部实生苗分为3种类型分开培育。
1型：从第1-8片叶与母本都没有形态差异（图1）；2型：第1-8片叶与母本显然不同，但又没有典型的父本三叶（图2）；3型：第1-8片叶出现与父本相似的三叶（图3）。（在试验方法中列3个图并不合适，用文字表述清楚即可）
图1一株资阳香橙实生苗的叶形演变顺序
Fig1.Themorphologicaldevelopmentvariationofleavesfromthe1to8leafletonasameseedlingsofZiyangXiangcheng(CitrusjunosSieb.exTanaka).
图2香橙×枳的F1群体中不同于母本的叶片
Fig2.Thezygoticoffspringwithtrifoliateleafletsorothercharacteristicswhichwerearedifferentfrombothtothefemaleparent(CitrusjunosSieb.exTanaka)andmaleparenttrifoliateorange(Poncirustrifoliata(L.))intheearlygrowingstage.
图3一株枳实生苗的叶形演变顺序
Fig3.Themorphologicalvariationofleavesfromthe1to8leafletonsameseedlingsoftrifoliateorange(Poncirustrifoliata(L.))
1.2.2SSR分子标记鉴定
参照谢让金的改良CTAB法提取实生苗与父母本的DNA。按江东、雷天刚的方法设计SSR引物，PCR反应体系和反应程序见雷天刚方法。筛选了12对引物，采用2对多态性高的SSR(SimpleSequenceRepeat）引物对实生苗进行杂种真实性鉴定。两对引物如下：SS17号引物的序列为:5`TTCATTTGGAACAAAACCCAATTC>3`,
5`GCTGCTAATCACAGCATCAAGAGA>3`;
CSSR038号引物的序列为:5`>CTTGAAAATAAGTTGAGCCA
5`>ATCCCCAAATGAATAATC。
扩增产物用8%的非变性聚丙烯酰胺电泳检测。
1.3耐碱杂种苗的筛选
1.3.1碱性土选择与制备
2008年9月，从碱性紫色土果园取土，该园曾于1999年5月上旬按株行距10×25cm栽种14万株枳3月龄实生苗，6月下旬至7月上旬，全部14万株枳实生苗无一例外地出现叶片黄化症状，植株矮小、生长不良。2006年该园重新建园栽种枳砧和卡里佐枳橙砧柑橘树，连年出现叶片严重缺铁黄化症状。，必需在每年的3月和7月分2次根施6%EDDHA-Fe才能防止叶片缺铁黄化。
从该园挖取未施EDDHA-Fe肥的果园背景土置于室内阴干混匀，以庄伊美的方法测定pPH值。12月20日将形态学杂种实生苗与父、母本的小苗同时移栽到该碱性紫色土上，分株编号。 1/4 1 2 3 4 下一页 尾页 |
