牙膏中沃氏葡萄球菌的分离与鉴定

论文导读：血浆和肉汤培养物混匀培养6h之内不凝固，结果显示血浆凝固酶阴性，而金黄色葡萄球菌阳性对照、阴性对照、肉汤对照结果分别为阳性、阴性和阴性。将血平板上少量溶血菌落划线接种于营养琼脂，挑取菌落制成菌悬液，用GP鉴定卡通过VITEK2全自动微生物鉴定系统进行鉴定。
关键词：葡萄球菌，分离，鉴定，生化鉴定
 

葡萄球菌属广泛的分布于自然界，是一种革兰氏阳性的球形细菌，显微镜下排列成葡萄串状，是医院感染的重要病原菌。论文参考网。论文参考网。沃氏葡萄球菌是葡萄球菌属的一种，有报道从人外伤分泌物中分离出沃氏葡萄球菌[1]，并有沃氏葡萄球菌致动脉栓塞的报道[2]。但也有学者在难治性牙周炎的龈下菌丛中发现了沃氏葡萄球菌[ 3-4 ]，并认为沃氏葡萄球菌是牙周致病菌[5]，王艳等[6]应用PCR技术克隆了沃氏葡萄球菌尿素酶基因的保守序列。但有关沃氏葡萄球菌的研究很少，本文在对牙膏进行金黄色葡萄球菌检测时，检出沃氏葡萄球菌，并对其生化特性进行研究，以期为今后沃氏葡萄球菌的研究提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

检验样品为旅游用牙膏（3g/支），来自送检样品，包装完好。

1.2 仪器和设备

所有试验用培养基均购自北京陆桥技术有限责任公司，VITEK 2 全自动微生物分析系统及相关配套试剂购自法国生物梅里埃公司。

1.3 方法

检验方法依据《化妆品卫生规范》（2007版）中金黄色葡萄球菌检测方法进行。操作步骤为：

2 结果与分析

2.1 菌落观察

菌落在Baird Parker培养基上呈圆形、光滑、较湿润，颜色为灰黑色，周围有晕圈；在血琼脂平板上菌落为圆形，灰白色，表面光滑，有少量溶血。

2.2 革兰氏染色镜检

将可疑菌落进行革兰氏染色，染色镜检为革兰氏阳性菌，排列成葡萄状，无芽孢和荚膜。

2.3 甘露醇发酵试验

将菌落接种于甘露醇发酵培养基中，36℃±1℃培养24h±2h，结果显示不能发酵甘露醇产酸。

2.4 血浆凝固酶试验

血浆和肉汤培养物混匀培养6h之内不凝固，结果显示血浆凝固酶阴性，而金黄色葡萄球菌阳性对照、阴性对照、肉汤对照结果分别为阳性、阴性和阴性。

2.5 VITEK 2生化鉴定

将血平板上少量溶血菌落划线接种于营养琼脂，挑取菌落制成菌悬液，用GP鉴定卡通过VITEK2全自动微生物鉴定系统进行鉴定。生化编码为271，判定为沃氏葡萄球菌（可能性为94%），具体生化结果见表1。

表1 沃氏葡萄球菌VITEK 2鉴定结果

3 讨论

葡萄球菌属主要存在于环境及人与动物的皮肤和粘膜上，是医院感染中的重要病原菌。在牙膏卫生指标中，金黄色葡萄球菌是必检项目之一，对沃氏葡萄球菌还没有相应的检测要求。论文参考网。沃氏葡萄球菌是牙周致病菌[5]，且其治病机制可能与该菌分解唾液和龈沟液中的尿素产生氨，增加龈下牙石的沉积，以及对牙周成纤维细胞的抑制作用有关。本研究在牙膏中检出沃氏葡萄球菌，且经VITEK 2全自动微生物鉴定系统鉴定为尿素酶反应阳性，牙膏中沃氏葡萄球菌污染是否可直接导致口腔疾病还有待进一步研究。

牙膏是人们生活中不可缺少的日用品之一，而宾馆用小牙膏的需求也随着旅游业的飞速发展而快速加大。在牙膏的生产过程中，往往会添加一定量的防腐剂，从而抑制牙膏原料中残留微生物的增殖和防止牙膏在使用过程中的细菌污染。但是，防腐剂添加不当或不均匀不能起到很好的抑菌作用，这给人们在使用过程中带来极大的安全隐患。因此，牙膏生产企业应加强安全卫生意识，提高自身生产质量和管理水平，避免因产品质量问题而影响到人们的身体健康。

【参考文献】
[1] 朱兴华，赵德军. 分泌物中检出沃氏葡萄球菌1例，黔南民族医专学报，2008，21（1）：51
[2] 张迎怡，丛洪良，裴诚民. 沃氏葡萄球菌致冠状动脉栓塞1例. 第三届海河之滨心脏病学会议，2007年
[3] Listgarten MA, Lai CH, Young V.Microbial composition and pattern of antibiotic resistance in subgingivalmicrobial samples from patients with refractory periodontitis[J]. J ClinPeriodontol, 1993, 64: 155-161
[4] Colombo AP, Haffajee AD, Dewhirst FE,et al. Clinical and microbiological features of refractory periodontitissubjects[J]. J Clin Periodontol, 1998, 23(2):169-180
[5] Ibragimov TI, Arutiunov SD, TsarevVN, et al. Clinical and laboratory studies of bacterial adhesion to validatethe choice of material for making provisional dentures for patients withperiodontal diseases[J]. Stomatologiia, 2002, 81(2):40-44
[6] 王艳，冯希平，李鸣宇，等. 沃氏葡萄球菌尿素酶基因保守序列的克隆. 上海口腔医学,2006, 2(15): 66-68