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香蕉1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶小亚基基因的克隆与序列分析-论文网

时间:2014-04-10  作者:魏军亚,刘德兵,魏守兴,谢子四,陈业渊
Blast比较结果中的Score分值为244~1399,其中rbcS-mc与尖叶蕉1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶小亚基rbcS1基因(AF008214)的相似性最高,Score分值为1399,一致性(identity)为98%(789/803)。

2.6香蕉1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶小亚基编码氨基酸序列的同源性分析

以cDNA序列推导的氨基酸序列进行BLASTP分析,结果显示所有的与该序列具有同源性的蛋白质都是rbcS蛋白。在NCBI蛋白质数据库中,共搜索到与rbcS-mc编码氨基酸有一定相似性的序列100条,其中相似性最高是小果野蕉(登记号为AAB63287),为98%(177/180)。将香蕉1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶小亚基氨基酸序列与其他植物rbcS氨基酸序列进行多序列比对,发现在所比对的氨基酸序列中MVAPFTGLKS、ETLSYLP、YDGRYWTMWKLP及RQVQCISFI四个序列高度一致。香蕉1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶小亚基基因编码了一个由281个氨基酸残基组成的蛋白质,其氨基酸序列与小果野蕉的氨基酸序列同源性达98%,二者长度相同,只有三个氨基酸差异,即在68位置上香蕉是Leu而小果野蕉是Val,在79位置上香蕉是Leu而小果野蕉是Met,在85位置上香蕉是Leu而小果野蕉是Val(图5)。

Ⅰ-MASSMLSSAAVVTSP----AQATMVAPFTGLKSSAAFPVTRKTNKDITSITSNGGRVSCMKVWPPIGKKKF67

Ⅱ-MASSMLSSAAVVTSP----AQATMVAPFTGLKSSSAFPVTRKANNDITSIVSNGGRVSCMKVWPPVGKKKF67

Ⅲ-MASSVMSSAAVATRGNG--AQASMVAPFTGLKSAASFPVSRKQNLDITSIASNGGRVRCMQVWPPINMKKY69

Ⅳ-MASSIVSSAAVATRGNG--AQASMVAPFTGLKSTASFPVSRKQNLDITSIASNGGRVSCMQVWPPINMKKY69

Ⅴ-MASSVLSSAAVATRTNV--AQANMVAPFTGLKSAASFPVSRKQNLDITSIASNGGRVQCMQVWPPYGKKKY69

Ⅵ-MASSILSSAAVASVNSASPAQASMVAPFTGLKSSAGFPITRKNNVDITTLASNAGKVQCMKVWPPLGLRKF71

Ⅶ-MASISSSAVATVNRSTP--AQASLAAPFTGLKSNVAFPVTKKANNDFSSLPSNGGRVQCMKVWPPIGLKKY69

ⅧMVSSMMVSSAATFTRASP--AQSSMVAPFTGLKSASAFPVTRKPNADLSHLPSNGGRVQCMKVWPIEGLKKF70

ⅨMVSSMMVSSAATFTRASP--AQSSMVAPFTGLKSASAFPVTRKPNADLSHLPSNGGRVQCMKVWPIEGVKKF70

ⅠETLSYLPDLSDVELAKEVDYLLRNKWIPCVEFELEHGFVYREHGNTPGYYDGRYWTMWKLPLFGCTDSAQVL139

ⅡETLSYLPDLTEVELGKEVDYLLRNKWIPCVEFELEHGFVYREHGSTPGYYDGRYWTMWKLPLFGCTDSAQVL139

ⅢETLSYLPDLSDEQLLKEVEYLLKNGWVPCLEFETEHGFVYRENNKSPGYYDGRYWTMWKLPMFGCTDATQVL141

ⅣETLSYLPDLSDEQLLSEIEYLLKNGWVPCLEFETEHGFVYRENHKSPGYYDGRYWTMWKLPMFGCTDATQVL141

ⅤETLSYLPDLSEEQLLSEIEYLLKNGWVPCLEFETERGFVYRENNKSPGYYDGRYWTMWKLPMFGCTDATQVL141

ⅥETLSYLPDMSNEQLSKECDYLLRNGWVPCVEFDIGSGFVYRENHRSPGFYDGRYWTMWKLPMFGCTDSSQVI143

ⅦETLSYLPPLSDEALSKEIDYLIRNKWVPCLEFELEHGFVYREHHHSPGYYDGRYWTMWKLPMFGCTDSAQVM141

ⅧETLSYLPTLKDEALLKQIEYLLRSKWIPCLEFCPK-GFVWRENHRSPGYYDGRYWTMWKLPMFGCTDAVQVA141

ⅨETLSYLPTMKDEALVKQIEYLLRSKWIPCLEFCPK-GFVWRENHRSPGYYDGRYWTMWKLPMFGCTDAVQVA141

ⅠKEVEECKKEYPGAFIRIIGFDNTRQVQCISFIAYKPPSFTEA----181

ⅡKEVQECKTEYPNAFIRIIGFDNNRQVQCISFIAYKPPSFTGA----181

ⅢAEVEEAKKAYPQAWIRIIGFDNVRQVQCISFIAYKPEGY-------180

ⅣAEVQEAKKAYPQAWVRIIGFDNVRQVQCISFIAYKPEGY-------180

ⅤAEVGEAKKAYPEAWIRIIGFDNVRQVQCISFIAYKPEGY-------180

ⅥQEIEEAKKEYPDAFIRVIGFDNVRQVQCISFIAYKPQVLLFLSSIC189

ⅦKEVGECKKEYPNAFIRVIGFDSVRQVQCISFIVSKPPGVL------181

ⅧKEVEECKKEYPHAFIRIIGFDNNRQVQCISFIAYKPTGY-------180

ⅨKEVEECKKEYPHAFIRIIGFDNNRQVQCISFIAYKPTGY-------180

图5香蕉rbcS推断的氨基酸序列与其它物种的rbcS家族氨基酸序列的同源对比

黑色区域:所有基因的保守氨基酸残基

Fig.5AlignmentofthepredictedaminoacidsequencesfrombananaandseveralotherrbcSgenes

Residueshighlightedinblackareconservedinallofthesequencesdepicted

Ⅰ拟南芥(Arabidopsis);Ⅱ油菜(BrassicanapusL);Ⅲ马铃薯(Solanumtuberosum);Ⅳ番茄(Lycopersiconesculentum);Ⅴ普通烟草(Nicotianatabacum);Ⅵ黄瓜(Cucumissativus);Ⅶ莴苣(Lactucasativa);Ⅷ香蕉(Musaacuminate);Ⅸ小果野蕉(Musaacuminata)

基于rbcs-mc氨基酸序列构建系统进化树,从树的聚类看,芭蕉科的香蕉和小果野蕉与菊科的莴苣聚为一类;十字花科的拟南芥和油菜聚为一类;茄科的马铃薯,番茄和烟草聚为另一类,而葫芦科的黄瓜单独为一类。

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