| 每个处理20-30个茎尖，3次重复。
玻璃化法：将茎尖置于MS+0.7mol·l蔗糖的固体培养基4℃预培养1d，装2.0ml冷冻管，每管装10个茎尖，在室温下用60%的玻璃化溶液PVS2装载30min，分别在PVS2、PVS3、PVS4、PVS5中0℃处理30、60、90、120min，移去原液，装入新鲜的保护液迅速投入液氮。每个处理20-30个茎尖，3次重复。
材料经超低温保存至少24h后取出冷冻管，25℃水浴化冻2min，蔗糖浓度为1.2mol·l的MS培养液洗涤，将茎尖接种到恢复培养基MS+BA0.6mg·L+NAA0.1mg·L+GA0.5mg·L中，暗培养一周，转移到光下培养，以形成叶或嫩芽为存活标准，统计再生率。
2结果与分析
2.1不同浓度蔗糖对试管苗生长速率的影响
表1不同浓度蔗糖对试管苗生长速率的影响
Table1Effectofdifferentconcentrationofsucroseongrowthrateofinvitroshoots
|
浓度
Concentration
/g·L
|
生长率 Growth rate/%
|
|
中砧1号
(Zhongzhen1)
|
M9
|
富士
(Fuji)
|
|
20
|
0.0240±0.0537d
|
0.0570±0.0850c
|
0.0210±0.0305c
|
|
30
|
2.6780±0.8933b
|
4.8840±0.4255a
|
1.4840±0.3015b
|
|
40
|
1.0640±0.0802c
|
2.5300±0.4021b
|
2.9590±0.3967a
|
|
60
|
3.8540±0.1286a
|
0.0000±0.0000c
|
0.0000±0.0000c
|
|
80
|
0.0160±0.0358d
|
—
|
0.0012±0.0027c
|
注：—为茎尖或植株死亡。数据采用LSD方差分析方法，小写字母表示不同处理间的差异显著性(P)。下同。
Note:-Meansshoottipsorplantsweredeath.DatawasanalyzedwithLSDtest,lettersinthesamecolumnmeansignificantdifferenceat0.05level.Thesamebelow.
蔗糖浓度对中砧1号试管苗生长速率有显著影响。与常规培养基（30g·L）相比，高浓度蔗糖（80g·L）和低浓度蔗糖（20g·L）均显著抑制中砧1号试管苗生长，20g·L和80g·L蔗糖中砧1号生长速率最低。M9和富士试管苗对蔗糖浓度的反应与中砧1号基本一致。20g·L和60g/L蔗糖浓度时M9生长速率最低，蔗糖浓度达到80g·L时植株茎尖出现死亡；蔗糖浓度为20g·L、60g·L和80g·L时富士试管苗生长均缓慢。中砧一号试管苗低温保存适宜的蔗糖浓度为20g·L。
2.2不同浓度CCC对试管苗生长速率的影响
表2不同浓度CCC对试管苗生长速率的影响
Table2EffectofdifferentconcentrationofCCCongrowthrateofinvitroshoots
|
浓度
Concentration
/mg·L
|
生长率 Growth rate/%
|
|
中砧1号
(Zhongzhen1)
|
M9
|
富士
(Fuji)
|
|
0
|
2.6780±0.8933a
|
4.8840±0.4255a
|
1.484±0.3015a
|
|
5
|
0.4400±0.6066b
|
0.2400±0.1949b
|
0.8440±0.0832b
|
|
15
|
0.3760±0.4244b
|
0.0357±0.0489b
|
0.0520±0.1163c
|
|
25
|
0.1440±0.1983b
|
0.0260±0.0371b
|
0.0600±0.0894c
|
|
35
|
0.0000±0.0000b
|
0.0000±0.0000b
|
—
|
CCC浓度对中砧1号试管苗生长速率有显著影响。培养基中加入低浓度CCC（5mg·L）就能显著抑制中砧一号试管苗生长。M9和富士试管苗对CCC的反应与中砧1号基本一致，即CCC浓度为5mg·L时，就可以对M9试管苗起到明显的抑制作用；浓度达到15mg/L时，对富士试管苗抑制作用明显，但高浓度产生毒害作用，茎尖死亡。中砧一号试管苗低温保存适宜的CCC浓度为5mg/L。
2.3不同浓度ABA对试管苗生长速率的影响
表3不同浓度ABA对试管苗生长速率的影响
Table3EffectofdifferentconcentrationofABAongrowthrateofinvitroshoots
|
浓度
Concentration
/mg·L
|
生长率 Growth rate/%
|
|
中砧1号
(Zhongzhen1)
|
M9
|
富士
(Fuji)
|
|
0
|
2.6780±0.8933a
|
4.884±0.4255a
|
1.484±0.3015a
|
|
0.1
|
0.2040±0.1266b
|
0.0158±0.0246b
|
0.0312±0.0455b
|
|
0.4
|
0.0000±0.0000b
|
0.0300±0.0415b
|
—
|
|
0.7
|
0.0820±0.0829b
|
0.0000±0.0000b
|
—
|
|
1.0
|
—
|
0.0183±0.0309b
|
—
|
ABA浓度对中砧1号试管苗生长速率有显著影响。低浓度0.1mg·L对中砧1号有明显的抑制作用。M9与富士对ABA浓度的反应与中砧1号完全一致，浓度达到0.4mg·L时，富士植株茎尖死亡。
2.4不同浓度B9对试管苗生长速率的影响
表4不同浓度B9对苹果品种和砧木试管苗生长率的影响
Table4EffectofdifferentconcentrationofB9ongrowthrateofinvitroshoots
|
浓度
Concentration
/mg·L
|
生长率 Growth rate/%
|
|
中砧1号
(Zhongzhen1)
|
M9
|
富士
(Fuji)
|
|
0
|
2.6780±0.8933a
|
4.8840±0.4255a
|
1.4840±0.3015a
|
|
60
|
1.3120±0.1907b
|
0.5000±0.1163b
|
0.030±0.0412b
|
|
80
|
—
|
0.0520±0.5385b
|
0.0000±0.0000b
|
|
100
|
—
|
—
|
—
|
|
120
|
—
|
—
|
—
|
B9浓度对中砧1号试管苗生长速率有显著影响。浓度为60mg·L时，中砧1号就能表现出明显的抑制作用。M9与富士对B9浓度的反应与中砧1号基本一致。浓度达到80mg·L时，中砧1号植株茎尖死亡，而M9和富士试管苗在B9浓度为100mg·L时茎尖死亡，不适合保存。
2.5包埋干燥法预处理对离体茎尖再生率的影响
表5包埋干燥法对离体茎尖再生率的影响
Table5Regenerationrateofshoottipsafterencapsulation-dehydration
|
预培养蔗糖浓度
Preculture
sucrose concentration
/mol·l
|
再生率 Regeneration rate/%
|
|
包埋时间
Encapsulat-
ion time /h
|
中砧1号
(Zhongzhen1) /%
|
M9
/%
|
富士
(Fuji) /%
|
|
0.1
|
2h
|
0.2400±0.0346gFG
|
0.2467±0.0416e
|
0.3000±0.0529ef
|
|
3h
|
0.2600±0.0200gEF
|
0.3867±0.0611cd
|
0.1333±0.1172gF
|
|
4h
|
0.2600±0.0346gEF
|
0.3733±0.0416cd
|
0.4800±0.0529bc
|
|
5h
|
0.1533±0.0231h
|
0.4467±0.0115bc
|
0.6333±0.1102a
|
|
0.3
|
2h
|
0.6400±0.0529b
|
0.3600±0.0529dCD
|
0.5200±0.0000bc
|
|
3h
|
0.5800±0.0000bc
|
0.6067±0.0503a
|
0.5067±0.0306bc
|
|
4h
|
0.7133±0.0416a
|
0.6067±0.0643a
|
0.5467±0.0808ab
|
|
5h
|
0.5667±0.0416cd
|
0.6333±0.0115a
|
0.3533±0.0231de
|
|
0.5
|
2h
|
0.4933±0.0503e
|
0.4867±0.0416b
|
0.2200±0.0000fg
|
|
3h
|
0.5067±0.0611de
|
0.3133±0.0115de
|
0.4133±0.0924cd
|
|
4h
|
0.3733±0.0757fD
|
0.3467±0.0416dC
|
0.2533±0.0306ef
|
|
5h
|
0.3400±0.0000fDE
|
0.3800±0.0872cdB
|
0.2200±0.0346fg
|
各个试验处理对中砧1号离体茎尖再生率有显著差异，预培养蔗糖浓度0.3mol·l，包埋干燥时间为4h时，恢复生长率最高，为71.33%。在同一处理下，M9和富士恢复生长率也较高，分别为60.67%和54.67%。M9预培养蔗糖浓度为0.1mol·l，包埋干燥时间为3h、4h、5h三个处理之间没有显著差异。预培养蔗糖浓度0.1mol·l，包埋时间5h时，富士茎尖恢复生长率最高。
2.6玻璃化法对离体茎尖再生率的影响
表6玻璃化法对离体茎尖再生率的影响
Table6Regenerationrateofshoottipsaftervitrification
|
玻璃化液
Vitrification solution
|
再生率 Regeneration rate/%
|
|
处理时间
Treatment time/min
|
中砧1号
(Zhongzhen1) /%
|
M9
/%
|
富士
(Fuji) /%
|
|
PVS2
|
30
|
0.5267±0.0306cd
|
0.2667±0.0306d
|
0.2667±0.0306d
|
|
60
|
0.7367±0.0321a
|
0.2433±0.0551de
|
0.2433±0.0551de
|
|
90
|
0.6267±0.0252b
|
0.2000±0.0173f
|
0.2000±0.0173f
|
|
120
|
0.4100±0.0529eF
|
0.2600±0.0100de
|
0.2600±0.0100de
|
|
PVS3
|
30
|
0.3533±0.0351fFG
|
0.2533±0.0503de
|
0.2533±0.0503de
|
|
60
|
0.5600±0.0200c
|
0.4867±0.0306b
|
0.4867±0.0306b
|
|
90
|
0.7333±0.0208a
|
0.6733±0.0208a
|
0.6733±0.0208a
|
|
120
|
0.4200±0.0100eEF
|
0.3233±0.0252c
|
0.3233±0.0252c
|
|
PVS4
|
30
|
0.3667±0.0252ef
|
0.1467±0.0252f
|
0.1467±0.0252f
|
|
60
|
0.3133±0.0058fGH
|
0.3367±0.0231c
|
0.3367±0.0231c
|
|
90
|
0.1467±0.0306i
|
0.7133±0.0208a
|
0.7133±0.0208a
|
|
120
|
0.0633±0.0231jL
|
0.4600±0.0265b
|
0.4600±0.0265b
|
|
PVS5
|
30
|
0.2500±0.0400g
|
0.2400±0.0100de
|
0.2400±0.0100de
|
|
60
|
0.2067±0.0289gh
|
0.2067±0.0603ef
|
0.2067±0.0603ef
|
|
90
|
0.1533±0.0153hi
|
0.1867±0.0551gh
|
0.1867±0.0551gh
|
|
120
|
0.0770±0.0709jKL
|
0.1833±0.0058hi
|
0.1833±0.0058hi
|
各个试验处理对中砧1号离体茎尖再生率有显著差异。 2/3 首页 上一页 1 2 3 下一页 尾页 |
