| 2.3 聚类分析
根据64份种质间的遗传相似性系数，采用UPGMA法构建树状聚类图(见图2)。聚类结果论文网，在相似性系数为0.768处将64份橄榄种质分为5簇。第1簇包括‘广太青皮榄’等48份种质；第2簇包括‘青皮’等8份种质；第3簇仅有‘细粒’1份种质；第4簇包括‘黄都’等4份种质；第5簇包括‘下院’等3份种质。从聚类结果可见，64份橄榄材料未出现依据材料种植区域分组的情况。如，同样来自汕头市潮阳区金玉镇彭处村的‘鸡心’等6个品种(编号24—29)就分别属于第1、4、5簇，说明供试材料并没有明显的地域性，这可能与各地相互引种栽植有关。但也有种植区域相同而聚类时聚在一起的。如来自潮州市饶平县东山镇东南村的‘东山1号’、‘东山3号’、‘东山5号’，来自揭阳市普宁市梅塘镇涂洋村的‘冬节园1号’和‘冬节园2号’，都分别聚在一起，后两者之间遗传相似性达0.9379，表明这2个种质间亲缘关系很近，遗传相似性程度高，它们可能具有相同的亲本，或可能其中之一是另一种质的变异品系。
将UPGMA 法得到的聚类结果转换为协表征矩阵，对协表征矩阵和相似系数矩阵的相关性进行Mantel 检验。结果表明，2 种矩阵极显著相关，相关系数为0.8055论文网，说明聚类结果较好地体现了种质之间的遗传关系。
图2 64份种质ISSR标记聚类图
Fig.2 Dendrogram for 64 accessions based on ISSR markers
注：1―64 为样品编号（见表1）
No.1―64 are the accessionsnumber in table 1
2.4 主坐标分析
为了进一步分析种质之间的关系，根据相似性矩阵对64份种质进行主坐标分析，前三个主坐标解释的变异分别为78.43 %、3.27%和1.71%，根据第一、二坐标对64份种质进行排序(见图3)。从主坐标图中可以较明显的看出64份橄榄种质在第一、二坐标排序中分成5个类群，第Ⅰ类群包括44份种质，均来自聚类结果中的第1簇，包括来自揭阳市普宁市梅塘镇涂洋村的‘冬节园1号’和‘冬节园2号’。第Ⅱ类群由8份种质组成，其中5份种质来自聚类分析中的第2簇，另外3份材料来自第1簇。第Ⅲ类群仅由1份种质即‘细粒’组成。第Ⅳ类群由7份材料构成，其中3份种质来自第2簇，2份种质来自第4簇，1份种质来自第1簇和1份种质来自第5簇。第Ⅴ类群由4份种质构成，其中2份种质来自第4簇，2份种质来自第5簇。上述结果表明，两种分析方法虽然存在分歧论文网，但是结果基本一致。此外，利用两种不同方法分析种质间的关系，有利于从多个角度分析种质之间的关系，从而有助于更进一步的分析。
图 3 64份种质依据ISSR分析的主坐标散点图
Fig. 3 The scatter plot of pricipal coordinate analysis of 64 accessionsbased on ISSR markers
注：1―64 为样品编号（见表1）★：汕头市潮阳区；▲：潮州市；◆：揭阳市；●：梅州市
No.1―64 are the accessionsnumber in table 1★: Chaoyang district of Shantou City;▲: Chaozhou City;◆:JieYang City;●:MeiZhou City
3. 讨论
3.1 橄榄ISSR的多态性
以往的研究表明，ISSR揭示的多态性一般都比RAPD高[10、15-17]。但是也出现RAPD揭示的多态性高于ISSR的，如Archak等[18]以及Hidetoshi Ikegami等[19]的报道。聂珍素用RAPD技术对福建橄榄进行分析，得到99.5%的多态性[7]。在本研究中， ISSR揭示的多态性为77.34%，虽然低于聂珍素[7]的分析结果，但仍显示出丰富的多态性，同时64份橄榄之间的遗传差异也被区分开来，证实了ISSR分子标记可以有效的应用于橄榄种质资源亲缘关系的分析[F10]。至于粤东地区与福建橄榄种质资源遗传多样性的差异，目前尚不清楚，还需后续进一步将两地资源置于同一条件下进行分析比较。
3.2 粤东地区橄榄遗传多样性
本研究的结果表明，粤东地区橄榄种质遗传多样性水平较低论文网，这可能与所用材料的来源地比较集中有关。来源地相对集中，使不同品种之间基因交流的可能性增大，遗传多样性水平降低，还表现为系统聚类结果未出现依据材料种植区域分组的现象。在Thimmappaiah等[20]的研究中也有类似的结果，来自不同地区腰果的种质其分子系统聚类结果与种质地理来源没有联系，作者认为这可能是来自不同地区的种质存在自由交换引起的。同样，杨本超等[21]在研究烤烟种质遗传多样性时指出，地理位置相近的材料其遗传相似性虽然较高，但是并不表现出类群和地理位置的密切相关[F11]。
由结果分析还发现，粤东地区橄榄种质存在同名异物现象。如‘三棱Ⅰ’和‘三棱Ⅱ’，农艺性状极为相似，在生产中被视为同一品种，但在核酸水平上却存在较大差异；又如3份同样以‘青皮’命名的橄榄‘广太青皮榄’(普宁)、‘揭西青皮’(揭阳)和‘青皮’(潮州)，并未表现出预期那样高的遗传相似性。说明通过ISSR分析，可以更准确地揭示品种间的亲缘关系论文网，把历史上或地域上由于命名而混淆的一些品种区分开来。3.3 聚类分析和主坐标
在本次研究中采用系统聚类分析和主坐标分析对64份种质之间的亲缘关系进行分析，从结果上看，虽然这两种分析方法的结果存在一些分岐，但是整体是一致的。在两种分析方法中，聚类分析中的第1簇和主坐标分析中的第Ⅰ类群基本一致。此外，在两种分析中‘细粒’均单独成类，这也表明该品种和其它品种间的亲缘关系相对较远。同时使用两种分析方法对种质之间的亲缘关系进行分析并不矛盾，系统聚类侧重对种质之间关系差异的量化分析，而主坐标分析则是从不同方向和层次分析种质或群体之间的关系，可使结果更加直观。因此，两者同时使用有助于不同方法之间的相互印证、相互补充。
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