| 2.2AFLP标记鉴定色泽变异品种（系）
54对AFLP引物组合在南果与南果红色变异系中可扩增条带数为1035条，可检测的多态性条带为7条，占总条带数的0.64％；考密斯及其色泽变异的4个品种（系）可检测条带数1080，其中多态性条带为101，多态性比率为9.32％。所检测的引物中，有7对引物M-CAG/E-AAC、M-CAG/E-ACC、M-CAT/E-ACG、M-CAT/E-ACC、M-CTA/E-AAG、M-CTA/E-ACT、M-CTC/E-AGG能将南果与其红色变异系区分开；有3对引物M-CAT/E-ACC、M-CTA/E-AAG、M-CTA/E-ACT能将考密斯、红考密斯、早红考密斯与其绿色变异系一一区分开（表2）；所有的54对AFLP引物均无法区分红安久及其绿色变异系。另外，考密斯及其色泽变异的4个品种（系）中34对引物能区分其中的2个品种（系），8对引物能区分其中的1个品种（系）。采用Nei-Li相似性系数的计算方法得出，南果与南果红色变异系之间的相似系数为0.965，考密斯及其色泽变异品种（系）之间的相似系数为0.878。
图1不同AFLP引物揭示的遗传差异
1～8.不同品种资源（编码同表1）
Fig.1GeneticdifferencerevealedbydifferentAFLPprimerpairs
1～8.Differentcultivarsoraccessions(codessequenceshownasTable1)
2.3SRAP标记鉴定色泽变异品种（系）
20对SRAP引物组合在南果与南果红色变异系中可扩增条带数为198条，可检测的多态性条带为3条，占总条带数的1.43％；考密斯及其色泽变异4个品种（系）可检测条带数202条，其中多态性条带为14条，多态性比率为7.14％。所检测的引物中，有3组引物em7/me3、em8/me7、em11/me5可分别将南果及其红色变异系鉴定开；em11/me5能将考密斯、红考密斯、早红考密斯与其绿色变异系一一区分（表2）；所有SRAP引物不能将红安久及其绿色变异系鉴定开。另外，考密斯及其色泽变异
图2不同SRAP引物揭示的遗传差异
1～8.不同品种资源（编码同表1）
Fig.2GeneticdifferencerevealedbydifferentSRAPprimerpairs
1～8.Differentcultivarsoraccessions(codessequenceshownasTable1)
的4个品种（系）中3对引物能区分其中的2个品种（系），9对引物能区分其中的1个品种（系）。对扩增结果采用Nei-Li相似性系数的计算方法，南果与南果红色变异系之间的相似系数为0.984，考密斯及其色泽变异品种（系）之间的相似系数为0.912。
表2变异品种（系）产生差异片段结果
Table2Polymorphicfragmentbythevariantcultivars(strains)
|
引物
Primers
|
长度(bp)
Length(bp)
|
南果
Nanguo
|
南果红色变异系
Red variant strain of Nanguo
|
考密斯 Doyenne du Comice
|
红考密斯
Red Doyenne du Comice
|
早红考密斯
Early red Doyenne du Comice
|
早红考密斯绿色变异系Green variant strain of Early red Doyenne du Comice
|
|
M-CAG/E-AAC
|
255
|
1
|
0
|
1
|
1
|
1
|
1
|
|
M-CAG/E-ACC
|
300
|
1
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
|
M-CAT/E-ACG
|
290
|
0
|
1
|
1
|
1
|
1
|
1
|
|
M-CAT/E-ACC
|
350
|
1
|
1
|
0
|
1
|
0
|
0
|
|
320
|
1
|
0
|
1
|
0
|
0
|
0
|
|
238
|
1
|
1
|
0
|
1
|
0
|
1
|
|
M-CTA/E-AAG
|
272
|
0
|
0
|
1
|
1
|
0
|
0
|
|
265
|
0
|
0
|
0
|
1
|
0
|
0
|
|
230
|
1
|
0
|
0
|
1
|
0
|
1
|
|
M-CTA/E-ACT
|
285
|
1
|
0
|
1
|
1
|
0
|
1
|
|
274
|
1
|
1
|
1
|
0
|
1
|
1
|
|
246
|
1
|
1
|
0
|
1
|
0
|
1
|
|
M-CTC/E-AGG
|
256
|
1
|
0
|
0
|
1
|
0
|
1
|
|
em7/me3
|
300
|
1
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
|
em8/me7
|
201
|
0
|
1
|
0
|
0
|
0
|
0
|
|
em11/me5
|
700
|
0
|
0
|
0
|
0
|
1
|
1
|
|
296
|
0
|
0
|
0
|
1
|
0
|
0
|
|
270
|
1
|
1
|
0
|
0
|
1
|
0
|
|
242
|
0
|
1
|
1
|
1
|
1
|
1
|
2.4不同品种（系）的指纹图谱及系谱关系
综合AFLP与SRAP标记的检测结果，获得4个品种（系）的特征谱带，南果梨在引物M-CAG/E-ACC300bp和em7/me3310bp（图2）处有特征带；红考密斯在引物M-CAT/E-AGG370bp和em11/me5296bp（图1、2）处有特征条带；早红考密斯在引物em8/me3240bp和em11/me3220bp（图2）处有特征带；早红考密斯绿色变异品系在em8/me3220bp（图2）处有特征带。特征带是进行品种或类型鉴别的重要指标，依据以上特征指纹我们可以将其从供识材料中立即识别出来。此外，指纹图谱还揭示了供试材料间的差异谱带，如考密斯在引物M-CAT/E-ACA240bp条带处缺失，其它品种（系）均有该条带扩增（图1）；早红考密斯的绿色变异在引物em7/me3315bp条带处表现缺失，其它品种（系）有条带扩增。SRPA引物em11/me5可区分除红安久及其变异系以外的所有供试材料，可应用于品种（系）的分子鉴别。
利用NTSYSpc2.02对8份供试材料的AFLP和SRPA谱带进行聚类分析，结果如图3。根据相似系数0.8可将所有品种分为2个类群，属东方梨的南果梨及其变异聚为一类，而其他6个西洋梨及其变异类型聚为另一类群，表明了东方梨与西方梨具有较远的遗传关系。在西洋梨类群中，各变异类型与其相应的原始品种表现出较高的相似性。
图3AFLP标记和SRAP标记结果聚类图
品种1～8同表1所示
Fig.3DendrogramofAFLPMarkandSRAPMark
Cultiavr1～8:notedasTable1
3讨论
3.1果树突变的鉴定方法
可用于突变鉴定的主要方法有形态学观察、同工酶分析、染色体变异数量与结构的检测、孢粉学研究和分子标记技术。 2/3 首页 上一页 1 2 3 下一页 尾页 |
