论文摘要：本文对南果梨(Pyrus ussuriensis Maxin)的茎尖离体培养快速繁殖进行了研究。结果表明：最适取材时间：春天（4月上旬）取材；最佳预处理是：GA 0.1 mg/L预处理一周；最佳灭菌时间为8～10 min；不同南果梨品种的茎尖增殖和生长能力不同；大红南果梨的最适继代培养基为：MS+BA 4.0 +NAA 0.4；生长素IBA促进生根，最适生根培养基为1/2MS+IBA 1.4，赤霉素GA 抑制生根；试管苗移栽的最适基质为珍珠岩：草炭土：河沙=1:1:1。
论文关键词：南果梨,茎尖,组织培养,离体快繁
南果梨（PyrusussuriensisMaxim.）属于蔷薇科（Rosaceae）、梨亚科(Pomaceae)、梨属(PyrusL.)植物，是辽宁南部山区特有的一种秋子梨。南果梨是具有前景广阔的朝阳产业。该品种果实色泽鲜艳、果肉细腻、爽口多汁酸甜适口，气味飘香，风味独特品质极佳，人见人爱，其果实独特风味已被我国东北、南方及俄罗斯的广大消费者所认可；适应能力及抗寒力强，高接树在-37℃时无冻害，且抗黑星病，因此市场发展潜力和发展前景十分广阔，南果梨生产潜藏着巨大的商机。
由于梨童期长、自交不亲和、杂合程度高，进行常规杂交育种改良比较困难。目前生产上繁育苗木主要采用嫁接、扦插等方法，这种方法繁育苗木的速度慢、费工多、成本高，限制其发展的主要原因之一是种苗品种混杂，质量差，病毒感染严重，建立并完善南果梨的良种繁育体系，加强品种选优扶壮，建立优良品系采穗圃和永久性种苗繁育基地，繁育优质的无病毒苗木，把好南果梨生产的种苗关是从根本上解决问题的有效方法。因此我们就可以利用组织培养的方法实现南果梨的脱毒快繁。
从20世纪70年代以来由于生物技术的飞速发展,组织培养技术在果树种质资源保存和快繁中得到了广泛的应用。梨树茎尖培养技术也取得了突破性进展,David(l979)用茎尖进行离体培养，并获得了完整植株。随后，赵惠祥用锦丰和早酥实生苗的茎尖培养获得植株。到目前为止，梨的茎尖培养成功的报道很多。但迄今未见有南果梨完整的工厂化无性快繁体系建立的报道。
本研究以南果梨为试材，以规模化生产为目的，选择符合规模化生产要求的植物生长调节剂进行了组织培养研究,系统地探讨了不同取材时间、有效地预处理、适宜的灭菌时间、不同激素组合对芽诱导和增殖及生根的影响,选择出了最佳增殖、生根培养基和移栽基质,旨在建立简便、有效、规模化生产南果梨种苗快速繁殖技术。南果梨离体快速繁殖体系的成功建立，可为商业化生产这一果树苗木提供技术和途径。
*通讯作者Authorforcorrespondence(E-mail:chenlijing1997@126.com;mahui1972@163.com)
1.材料与方法
1.1材料
南果梨材料为采自沈阳农业大学梨园的小南国梨和抚顺清原县农科所的和大红南国梨。
1.2方法
本试验研究部分在辽宁省农业生物技术重点实验室的组织培养室内进行,扩繁生产部分在沈阳农业大学生物科学技术学院产学研基地进行。为确保试验结果可应用于生产,试验重复多次。
1.2.1消毒方法的筛选
采自抚顺清原县农科所的清原大红南果1号，外植体为中、下部健壮新生枝条，采集时间为春季晴天中午。
将从生长健壮的植株上采下的无病虫害的一年生清原大红南果1号枝条剪下，用洗洁精逆向刷洗枝条，后用自来水冲洗干净。用解剖刀将枝条切成茎段（每个茎段带有一个腋芽），置于小烧杯中，用纱布封口，自来水流水冲洗30min，放入超净工作台上灭过菌的小烧杯里，用75%的酒精浸泡30s，用无菌水冲洗1次，再用0.1%HgCl溶液灭菌6～12min，无菌水冲洗5～6次，放在无菌滤纸上吸干材料表面水分，接种于MS+BA1.5+NAA0.2+蔗糖30g+琼脂7.0g+pH5.8培养基上，每10d调查1次,调查材料接种后的污染情况、外植体不同接种部位、不同接种方向诱导分化情况等，每隔30d继代1次。
1.2.2材料的预处理
分别于秋天（10月），春天（4月上旬）取材。
处理Ⅰ为取得的材料冲洗后直接切成茎段（每个茎段带有一个腋芽）在流动的自来水下冲洗30～60min，之后在超净工作台内进行灭菌处理。处理Ⅱ是将取得的材料先在0.2mg/LGA溶液中浸泡一周（每天换一次培养液）后，将枝条切成茎段（每个茎段带有一个腋芽）再进行灭菌处理。处理Ⅲ是将取得的材料以清水浸泡一周且每天换水，其它处理同处理Ⅰ。
1.2.3不同品种诱导分化的对比性研究
供试品种为采自沈阳农业大学梨园的小南果和采自抚顺清原县农科所的清原大红南果1号、清原大红南果2号、清原大红南果3号，外植体为中、下部健壮新生枝条，采集时间为春季晴天中午。
茎尖在诱导培养基上培养30d后，调查每瓶中茎尖生长量，然后按不同处理得出平均数，并计算出茎尖生长率及茎尖增殖率。计算公式为：茎尖生长率=生长的茎尖数／接种茎尖数×100%，茎尖增殖率=增殖的茎尖数／接种茎尖数×100%。
1.2.4不定芽的继代增殖
本试验配制了10种不同的茎尖增殖培养基（见表5），以研究激素对大红南果梨1号茎尖再生的影响。
将诱导的大红南果梨1号丛生芽接种于不同激素浓度与配比的MS+蔗糖3%+琼脂0.7%，pH5.8培养基中，每一类接种40个茎尖，培养条件同上，30d后观察并统计结果。
1.2.5试管苗的生根
将试管内的绿色无根大红南果梨1号幼苗从靠近基部的地方完整切下，转移到各生根培养基中，筛选适宜的生根培养基（见表6）。 1/4 1 2 3 4 下一页 尾页 |
