| 胚状体诱导及再生情况统计见表3。
表3培养基对诱导胚状体的影响
Table3Effectofmediumonsomaticembryoformation
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组合
Cross
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基本培养基
Basic medium
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IBA
（mg/L）
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BA
（mg/L）
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胚状体生长量
Yield of somatic embryo
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成苗
plantlet
|
成苗率(%)
plantlet rate
|
|
1
|
MS
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0.5
|
0
|
++++
|
N
|
0
|
|
2
|
MS
|
0.2
|
1.0
|
++++
|
Y
|
2
|
|
3
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MS改良
|
0.5
|
1.0
|
++
|
N
|
0
|
|
4
|
MS改良
|
0.2
|
0
|
++
|
N
|
0
|
备注：++：生长一般；++++：生长旺盛；N：否；Y：是
Note：++：growmoderately;；++++：growvigorousl；N：no；Y：yes
MS培养基胚状体的生长量旺盛（表3），MS（改良）胚状体生长量一般，MS培养基上的胚状体可发育成正常植株,在MS（改良）的胚状体不能发育成正常植株。MS（改良）的大量元素是MS的一半，说明胚状体的诱导需要高的无机盐成分。BA的有无对胚状体的生长量影响不大，但BA是胚状体成苗所必须有的。
胚状体为黄绿色半透明状，易于分离，有的能清晰的看到胚根和子叶；胚状体的发生是不同步的（图版8）。在继代培养中，大多数胚状体不能发育成完整植株，而是大量增殖；少数胚状体上部子叶发育成杯形、喇叭形或片状结构，这些结构可以不停发育、生长，但不能萌发出嫩叶及发育成完整植株（图版11）。而且培养的条件不适合，发育早期的体胚又重新变为无序结构形成新的胚性细胞团，而不能进入成熟发育。
3.讨论
本实验以陇东马牙枣盛花后50～60d的幼胚为试材，采用三步培养法诱导胚状体，获得47.62%的幼胚萌发率，将萌发后的子叶胚诱导愈伤组织组织获得95%～97%的愈伤组织诱导率。这种方法可以为枣的幼胚培养提供另外一种思路，可以将幼胚通过带胚乳培养，再将萌发后的子叶胚诱导愈伤组织，再经愈伤组织诱导不定芽或胚状体成苗。
本实验获得高频率，生长旺盛的胚状体，但成苗率仅2%，大多数胚状体不断增殖，不能发育成完整的植株。体胚的成熟发育需特殊的条件：合理的外源激素配比，体胚从母体中剥离下来及额外添加的有机附加物等（王立忱，2009）。胚状体具有胚的结构，正常萌发，也许像种子一样需要打破休眠，可以参考（张存智等，2008）研究结果，胚状体经过一定的冷处理，也许可以提高成苗率。总之体胚的发育与成熟条件，有待于进一步的研究。
4.结论
本实验采用三步培养法，进行了枣幼胚愈伤组织诱导和胚状体发生研究，在MS-H（曹孜义，2002）+ZT0.5mg.L+IAA0.6mg.L+蔗糖50g.L+LH0.5g.L+琼脂4.0g.L+PVP0.2g.L幼胚萌动培养基上获得47.62%的幼胚萌发率；诱导愈伤组织适宜的培养基为Nitsch培养基上附加BA1.0mg.L+2，4-D1.5mg.L+蔗糖30g.L+琼脂4.0g.L。诱导胚状体培养基宜选用，MS+BA1.0mg.L+IBA0.2mg.L+LH0.5mg.L+Vc0.1mg.L+蔗糖30g.L+琼脂4.0g.L，并获得再生植株。 2/2 首页 上一页 1 2 |
