图1 葡萄中ABAR/CHLH 基因核苷酸序列及其推导的氨基酸序列
Figure 1 The nucleotide and its deduced amino sequences ofABAR/CHLH gene in grapevine.
图2 葡萄与其他物种之间ABAR/CHLH的聚类分析
Figure 2 Phylogenetic analysis of ABAR/CHLH and other species homologues
图3 DAS 服务器对葡萄中ABAR/CHLH氨基酸序列跨膜区域的预测
Figure 3 Transmembrane domain of grapevine CHLH/ABAR amino acid sequecepredicted by DAS server.
2.2 葡萄果实中ABAR/CHLH基因Southern 杂交分析
为了检测 葡萄果实中ABAR/CHLH基因在基因组的存在情况，基因组DNA 分别由3种限制性内切酶酶切(这3个内切酶在探针内部没有酶切位点)。基因组DNA经BamHⅠ、SpeⅠ和XbaⅠ酶切杂交后分别产生1 条明显的杂交条带，表明葡萄中ABAR/CHLH基因在基因组中以单拷贝形式存在(图4)。
图4Southern 杂交分析葡萄中CHLH/ABAR基因的拷贝数
Figure4 Southern-blot analysis of the copy number of CHLH/ABAR gene ingrapevine..
2.3 葡萄果实中ABAR/CHLH基因在始熟期前后表达量的变化
图5 葡萄果实始熟期ABAR/CHLH基因表达水平的变化
Figure 5 Changes of the mRNA expression of CHLH/ABARgene during the verasion of grape berry
通过实时荧光定量PCR技术对玫瑰香葡萄果实始熟前后ABAR/CHLH表达量进行分析，结果如图5表明，ABAR/CHLH基因表达量有一次快速升高的过程：随着果实成熟启动，果实开始退色，基因的表达量开始升高，着色前达到高峰；果实着色后，基因表达量逐渐降低，至全红时降到最低。以上结果表明ABAR/CHLH基因与果实的着色启动有关，但果实着色一旦启动后却不需要ABAR/CHLH基因的持续高表达。
2.4葡萄果实ABA在始熟期前后含量的变化
从图6中可以看出，大绿期后果实中ABA含量迅速增加，至转色期达到高峰，随后开始降低，至全红期ABA含量仍然很高，是大绿期果实中ABA含量近3倍。因此，葡萄果实ABA在始熟期前后含量的变化表明，葡萄果实成熟的启动依赖于ABA快速积累，果实的成熟需要ABA维持相对较高的水平。
图6：葡萄果实始熟前后ABA含量的变化
Figure 6 Changes incontent of ABA around the onset of grape berry ripening.
3 讨论
3.1 葡萄果实中脱落酸受体ABAR/CHLH基因的的特性
本研究通过生物信息学发现生物论文，ABAR/CHLH蛋白在进化上高度保守。葡萄果实中脱落酸受体ABAR/CHLH基因编码蛋白与草莓（ACS94977)和拟南芥（CAA92802 ）一样，都含有1381个氨基酸；比金鱼草（CAA51664, 1379aa)分别多了2个氨基酸；比烟草(AAB97152,1382aa) 、蓖麻(XP_002532078, 1382aa）和桃（AC057443, 1382aa) 少了1个氨基酸；比大豆（CAA04526，1383aa) 和大麦 （AAK72401, 1383aa)少了2个氨基酸；比水稻(ABF95686，1387aa）少了6个氨基酸。因此，从氨基酸数量来看，水稻比较特殊，因此在聚类分析中水稻单独归为一类（图2）。最近研究发现，拟南芥细胞中ABAR/CHLH 是一个跨膜蛋白，跨膜区在叶绿体膜上，N和C端暴露在细胞质中[13]。在大麦和水稻中等单子叶植物中ABAR/CHLH基因含有2个拷贝，在拟南芥和大豆中等双子叶植物中该基因只有一个拷贝[13,14]。本研究发现，在葡萄基因组中ABAR/CHLH以单拷贝形式存在（图5），其预测的编码蛋白含有三个跨膜区，并集中地分布在该蛋白的N端（图3）。因此，从基因核苷酸及其推测氨基酸序列相关分析表明，本研究从葡萄果实中成功分离了ABAR/CHLH基因论文发表。
3.2 ABA及其受体ABAR相互协调促进了果实的成熟启动
关于ABA对葡萄果实发育的影响，前人大量的工作揭示了ABA在葡萄果实成熟中的主导调控作用[15-24]。本研究也发现，花后8周后随着果实成熟的启动，果肉中ABA 水平开始快速上升，进一步证实了ABA在葡萄果实成熟过程中发挥着重要的作用。
ABA执行其生物学功能的过程，实质上是一个细胞信号转导过程。不难理解，植物激素与其受体的相互作用是激素信号转导中最为关键的一步。本研究观测到，围绕玫瑰香葡萄果实成熟启动的前后生物论文，果实的颜色呈现了明显的变化：深绿—浅绿—始红。在这颜色转变过程中，ABA水平呈现了持续增加的变化趋势，而ABA受体ABAR/CHLH基因转录水平呈现了先快速升而又迅速降低的变化趋势。值得关注的是，着色前ABA含量及其受体基因转录水平同时迅速增加，因此我们认为，果实的成熟启动不仅依赖于ABA含量迅速增加，而且还依赖于其受体基因表达水平快速上升。但果实成熟启动后，ABA水平继续缓慢上升，而ABAR/CHLH基因转录水平则快速下降。这一结果揭示了ABA在完成启动果实成熟功能后，首先通过降低ABA受体基因表达水平来减弱这一效应。为此我们推测，在葡萄果实发育的后期，为了满足果实成熟启动的需要，果肉细胞首先启动了ABA合成途径而促进了ABA快速积累，其受体也同时被某种机制诱导高表达。大量的ABA及其受体大大加速和放大了ABA的细胞信号转导过程，从而快速启动了一系列果实成熟相关基因的表达，使果实成熟进程向着不可逆的方向发展。本研究在一定程度上揭示了植物激素为了发挥最大效应，需要激素水平与其受体水平协调变化。
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