超临界CO2流体萃取法提取粉防己碱

论文导读：药材粉防己采自安徽省亳州市。取粉防己碱对照品适量，精密称定后配置成浓度为1.00mg／mL的对照品溶液。
关键词：粉防己，超临界CO2流体萃取法，粉防己碱
 

粉防己是防己科粉防己(Stephania tetrandra S．Moore)的干燥根，其中的主要化学成分为粉防己碱和防己诺林碱等生物碱类成分[1]，过去的提取工艺是用85％的乙醇提取粉防己中的总生物碱，在乙醇浓缩液中加酸沉淀除去其中的脂溶性杂质，用氨水碱化酸水液，再用氯仿反复进行萃取，除去水溶性杂质，回收氯仿得总生物碱，所得总生物碱用丙酮精制。在这一提取过程中要使用大量的氯仿，成本较高，且萃取和回收氯仿时，操作者会吸入体内大量的氯仿而对健康造成损害，同时也会对环境造成一定的影响，不利于工业生产。受到超临界CO2流体萃取法提取生物碱类成分的启发[2][3]，我们摸索确立了超临界CO2流体萃取法提取粉防己碱的工艺条件，并比较了不同提取方法对提取效果的影响，结果证明超临界CO2流体萃取法不仅溶剂用量较少，提取率高，而且含固量低，具有较高的工业利用价值。论文格式。

1 仪器与材料

药材粉防己采自安徽省亳州市。论文格式。经药学系刘学医老师鉴定为防己科防己(Stephania tetrandraS．Moore)的干燥根。

HA120-40-01型超临界萃取装置为江苏华安科研仪器有限公司生产；Waters高效液相色谱仪；HC-2514高速离心机由中佳科技创新有限公司生产；所用试剂均为色谱纯。

2 方法

2.1 粉防己药材的提取

2.1.1 热回流提取法

取粉防己粉末1份，约重10g，精密称定后置于100ml圆底烧瓶中，水浴加热回流提取2次：第1次加95％乙醇40ml，回流2h；第2次加95％乙醇40ml，回流2h，合并两次的提取液，滤过，定容至100ml，取滤液1mL，加3mL甲醇处理后，离心，取上清液进样测定。

2.1.2 超声提取法

取粉防己粉末1份，约重10g，精密称定后置于锥形瓶中，加甲醇80mL，超声30min，放冷，过滤，定容至100ml，取溶液1ml，加3mL甲醇处理后，离心，取上清液进样测定。

2.1.3 索氏提取法

取粉防己粉末1份，约重10g，精密称定后装入折叠好的小滤纸筒中，放入索氏提取器，烧瓶中加95％乙醇80mL，在水浴上提取至回流液无色即可。提取液于水浴上回收溶剂小体积，转移至100mL的容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取1ml溶液，加3mL甲醇处理后，离心，取上清液进样测定。

2.1.4 超临界CO2流体萃取法

取粉防己粉末1份，约重10g，加适量的氨水乙醇液拌匀，密闭24h。装入1L的萃取釜中，在萃取Ⅱ压力达到30MPa、温度达到60℃，分离Ⅱ压力达到8MPa、温度达到45℃，分离Ⅲ压力达到6MPa、温度达到50℃时，连续泵入95％乙醇，CO2流量为30～45kg／h，连续萃取2h。每隔0.5h放取解析液1次，共得解析液1990mL。另取约重10g的粉防己粉，如前进行萃取，得解析液2030mL。上述解析液浓缩后定容至100ml，取1ml样液，加3mL甲醇处理后，分别离心，进样测定。

2.2 粉防己碱的含量测定

2.2.1 色谱条件[4]

色谱柱为岛津CLC-ODS (150mm×4.6mmID, 5μm)；流动相为含0．06％二乙胺的甲醇一乙腈一水(3:1:1)溶剂系统，流速为1.0ml/min；检测波长为283nm；柱温为30℃；进样量：5μl。

2.2.2 标准曲线的制备

取粉防己碱对照品适量，精密称定后配置成浓度为1.00mg／mL的对照品溶液。将该溶液用流动相稀释，制备成每mL含0.05，0.10，0.25，0.50，0.75，1.00mg粉防己碱的系列标准溶液，按上述条件分别进样5μl，以粉防己碱的峰面积Y为纵坐标，浓度X为横坐标作图，求得粉防己碱的回归方程为：Y=126.74X+30.46，r=0.9999(n=6)。粉防己碱浓度在0.05-1.0mg范围内与峰面积线性关系良好。

3 结果

实验结果见表1。

表1 不同提取方法效率比较

注：提取率以索氏提取法为100％。

4 讨论

粉防己中富含多种生物碱，其提取方法也很多，其传统的氯仿萃取法在全国各大医药院校的中药系实验讲义中一直沿用，但具有毒性大、价格贵、操作繁琐等缺点。考虑到工业生产的安全及可行性，本实验仅选择了安全性较高甲醇、乙醇等溶剂作为提取溶剂，通过对比超声提取法、热回流法、索氏提取法已经超临界CO2流体萃取法的提取效率，发现超声法提取率明显较低，不宜作为药材的提取方法；而索氏提取法的提取率最高，结果与文献报道的含量比较接近，可以作为粉房己碱的提取工艺采用，但其操作十分繁杂，所用时间较长。而超临界CO2流体萃取法是利用超临界CO2的高渗透性和高溶解能力来提取和分离物质的一种新的单元提取分离技术。论文格式。本法具有常温、无毒、使用安全简便、萃取时间短、产品质量高等特点，它主要用于低极性的小分子化合物的萃取，对于极性稍大的化合物(如某些内酯、生物碱、黄酮等)，可在使用夹带剂的条件下将这些物质从固体物料中萃取出来，对于一些热敏性和易氧化的物质，本法尤其适合。从本实验结果可看出，超临界萃取的萃取液中粉防己碱的含量高，提取效率仅次于索氏提取法，且提取时间短，消耗试剂少，是提取粉防己碱等生物碱较为理想的方法。

参考文献
[1] Li J P，Di L Z，Xu H．Extract and isolation of non-hydroxy-benzene alkaloid in Stephaniatetrandra S．Moore E[J]．Chin.Tradit.HerbDrugs(中草药)，2002，33(5)：407．
[2]王振中，彭国平．超临界CO2萃取技术提取夏天无成分的研究[J]．中国中药杂志，2002，27(8)：585．
[3]包玮鸳,吴立成,何忠平,王宜祥. 超临界CO2流体萃取法提取延胡索乙素[J].中药材, 2004, 27(7):502-504.
[4]冯碧敏，叶云，张吴.高效液相色谱法测定防己中粉防己碱含量[J]. 中国药业, 2005, 14(11), 36-37.