论文摘要：以“金桃”猕猴桃（Actindia chinensis cv. ‘Jintao’）种子的胚乳为外植体，探讨了培养基种类、植物生长调节剂种类与浓度、蔗糖浓度以及暗培养等条件对胚乳培养器官形成的影响。试验结果表明：与NAA相比，2,4-D能提高“金桃”猕猴桃胚乳愈伤组织的诱导率，在1/2MS+1 mg/L 2,4-D+3 mg/L BA+20g/L蔗糖的培养基上对胚乳愈伤组织诱导率最大；对不定芽的分化而言，胚乳愈伤组织暗培养7d后，在1/2MS+0.1μmol/L NAA+ 5μmol/L BA+20 g/L蔗糖的培养基上分化率最高。
论文关键词：猕猴桃,愈伤组织,植物生长调节剂,胚乳培养
胚乳培养是常用的倍性育种手段。被子植物胚乳是双受精作用的产物，属于三倍体组织，因此通过对植物种子成熟胚乳或未成熟胚乳进行离体培养，可能筛选得到一些重要的新种质材料，对以营养繁殖为主的果树而言具有重要的育种价值。胚乳培养在葡萄、柑橘、柿树、枇杷、杨桃、枣、西番莲、银杏等果树的研究中有着广泛的应用，并得到了无核无籽的育种材料，同时对改良水果的某些食用品质具有重要的应用价值。
猕猴桃是一种营养丰富的水果，具有很高的经济价值和药用价值。由于猕猴桃果实中种子过多，大大影响到其食用品质。为获得猕猴桃无籽或少籽的材料，前人对猕猴桃进行了的胚乳培养的研究，但是对猕猴桃胚乳组织再生过程中的体系优化的研究尚未报道。“金桃”是我国育成的猕猴桃优良品种，在意大利等国有广泛的推广，其商品性状优良，在目前的国际市场中具有较好的竞争力。本文以猕猴桃“金桃”种子的胚乳为试验材料，通过器官发生途径诱导形成不定芽，探讨了培养基种类、植物生长调节剂组合、不同浓度蔗糖以及暗培养时间对不定芽形成的影响，以求建立一个高效的适合猕猴桃胚乳培养的再生系统。为通过胚乳再生植株改良和选育猕猴桃新品种提供技术参数。并应用流式细胞仪鉴定了胚乳愈伤组织诱导得到的植株染色体倍性。
1材料和方法
1.1植物材料
选取猕猴桃金桃品种（Actindiachinensiscv.‘Jintao’(2n=4x=116)中华猕猴桃黄瓤，意大利产）的果实，用自来水冲洗30分钟，75%酒精灭菌处理1min，然后用0.2%HgCl灭菌处理20min，再用无菌水冲洗3次。在无菌条件下，取出种子，剥去种皮并去掉胚，接种在培养基中。培养基为1/2MS附加琼脂粉5g/L、蔗糖20g/L，用0.1mol/L的HCl或者NaOH调整pH值至5.8，在121℃（1.2kg/cm）高压灭菌20min。
1.2试验设计
1.2.1植物生长调节剂对愈伤组织和器官形成的影响
取猕猴桃“金桃”的去胚胚乳为外植体进行试验。接种到含有NAA（0，1，2mg/L）或2,4-D（0，0.5，1.0mg/L）和BA（0.5，1，3mg/L）组合的愈伤组织诱导培养基（30ml）上，探讨不同植物生长调节剂种类与浓度对猕猴桃胚乳愈伤组织形成的影响。
以NAA（0，0.1，0.5μmol/L）和BA（0，1，5，10μmol/L）进行组合，探讨不同植物生长调节剂种类与浓度对胚乳愈伤组织中器官形成的影响。
1.2.2培养基种类对器官形成的影响
取30d的猕猴桃胚乳愈伤组织作为外植体，接种到MS，1/2MS和B5三种不同培养基上，均附加0.1μmol/LNAA和5μmol/LBA，20g/L蔗糖，直接放在光下培养，探讨基本培养基对器官形成的影响。
1.2.3糖浓度对愈伤组织分化的影响
同上取30d的猕猴桃胚乳愈伤组织作为外植体，接种到1/2MS+0.1μmol/LNAA+5μmol/LBA的再生培养基中，附加不同浓度的蔗糖（10，20，30，40，50g/L），30d后观察胚乳愈伤组织的分化情况，探讨蔗糖浓度对器官形成的影响。
1.2.4暗培养处理
同上取30d的猕猴桃胚乳愈伤组织作为外植体，接种到1/2MS+0.1μmol/LNAA+5μmol/LBA＋20g/L蔗糖的再生培养基上，进行不同时间（0，7，14，21d）的暗培养后转入光下培养，探讨暗培养时间对器官形成的影响。
1.3培养条件
培养条件为：在25℃,日光灯照明的16/8h的光周期，光照强度40umolms下培养。
1.4倍性鉴定
1.4.1提取液配制
10mmol/LMgSO+50mmol/LKCl+5mmol/LHEPES+0.25%TritonX-100+1%(W/V)PVP-30。
1.4.2鉴定方法
取约2cm的不定芽苗顶部叶为多倍体检测材料。加入1ml0℃的提取液中,在培养皿里用锋利的刀片快速将其切碎,溶液用300目尼龙网过滤至离心管中,3000rpm的转速离心,弃去上清液，加入BD染色液400l，以实生金桃植株叶片为对照采用BDFACSCalibur流式细胞仪进行倍性鉴定。
1.4数据统计
以上每个处理3次重复，每次重复15个外植体。培养30d和45d统计胚乳愈伤组织形成情况，45d统计不定芽和不定根的数量。试验结果均采用平均值表示，并运用DPS7.05软件中进行统计学分析。
2结果与分析
2.1植物生长调节剂对猕猴桃胚乳愈伤组织形成的影响
接种10d后，胚乳开始表现出显著变化，在切口处出现少量的乳白色或淡黄色瘤状疣点。愈伤组织首先从切口处产生并不断增大，颜色为乳白色或淡黄色，质地较疏松。生长素和细胞分裂素对猕猴桃胚乳愈伤组织的诱导有显著的影响（表2.1）。在含有2,4-D的培养基中，接种后10d，愈伤组织增殖旺盛，仍为乳白色或淡黄色；但在45d后，愈伤组织的增殖速度下降并趋于稳定，而此种愈伤组织保持于原培养基或转入同样培养基中，它们无组织分化，并在转入新培养基初期有一定的增殖效应。 1/4 1 2 3 4 下一页 尾页 |
