| 为了获得无菌，选择杀菌效果好、但对试材破坏力较小的杀菌方法及处理时间尤为重要。消毒时间以0.1%升汞浸泡6min最为适宜，8min次之；消毒4min，材料表面消毒不彻底，污染严重；消毒10min/12min虽然消毒效果较好，但又容易把材料杀死致使外植体褐变，存活率降低。
培养条件一般在基本培养基中添加蔗糖20mg/L,琼脂6g/L,用1N的NaOH调节pH值5.2,培养基在121℃、131Kpa的条件下灭菌20min.接种后培养在温度为25±2℃,光强度为2500Lx,光周期为16h黑暗8h光照的，条件下。刘树英等研究发现关照强度为3000和4000Lux为芽增值的最适光强，芽增殖数量多切增殖系数分别达4和4.5；还指出PH为5.4时培养生长长度达7-9cm。通过实验研究表明，黑暗条件有利于越橘的不定芽的诱导。1996年，Rida(1996)进行叶片培养时，先在黑暗条件下预培养两周，有效地提高不定芽的诱导率。邢瑞丹等以Sunrise和Geo两个越橘品种试管苗叶片为外植体材料结果表明：最适的暗培养时间为14d，近轴面放置效果最好。
越橘是对土壤酸度要求很高的树种，只在PH值较低的情况下才能生长良好。在组织培养中外植体不定芽的分化同样受到培养基酸度的影响。PH值显著影响越橘外植体的再生频率，同时也显著影响平均再生芽数。再生频率随着PH值的升高而下降。PH值低于5.2或高于5.3均不利于丛生芽的诱导，表现低分化率，且死亡数目很多，适当的PH值对丛生芽的诱导是非常重要的。
1.2继代增殖培养
不用外植体的类型对越橘继代培养也有着明显的影响，研究表明叶片产生的芽在初期与茎段节处萌发的腋芽相比较弱小，但是经过壮苗培养后长势可跟上腋芽，1个叶片可出芽2-8个。宁志怨在在越橘丛生芽的诱导上利用改良MS培养基，MS+2mg／LZT+o．2mg／LNAA的增殖培养基上，经过两次继代培养后越橘的增殖系数可达到30-50倍左右。并且发现利用在初代培养过程中加入维生素C从而有效的提高了越橘茎段的抗氧化性和防止了越橘茎段的褐化。刘树英对园蓝（Gardenblue）等七个兔眼越橘表明，茎段芽的萌发生长适合的激素配比为15mg/L2ip+0.02mg/LNAA，并且2ip的浓度为15mg/L时，及ZT的浓度为3mg/L时对芽的萌发有利。
把当年生枝条剥去芽鳞，切去基部的受损组织，接种于诱导芽萌发的培养基中。2周后开始萌发；5周后芽长成4-5cm左右的新梢，侧芽同时也萌发出2-4个不定芽。和加卫和徐中志等人在云南越橘当年生休眠枝条上去外植体在添加ZT浓度为0.5的改良WPM获得成功。研究表明以：以北高丛越橘Sunrise和南高丛Geo两个越橘品种试管苗叶片为外植体材料，以改良的WPM为基本培养基，不同基因型不定芽再生能力不同，Sunrise品种在WPM+4.0mg／LZT+0.3mg/LIBA+1.0mg／LTDZ+20g／L蔗糖+6g／L琼脂培养基中生长最好，离体叶片不定芽再生频率达100％，再生不定芽数可达4.5个以上；Geo品种最适宜培养基为WPM+4.0mg／LZT+0.3mg／LIBA+20L蔗糖+6g／L琼脂，叶片不定芽再生频率达到100％。
1.3愈伤组织诱导及分化
在对矮丛越橘‘Blomidon’品种的试管苗叶片为外植体的愈伤组织研究过程中，韩婷婷等发现1/2WPM为适宜的培养基;添加0.5mg·LCPPU+1.0mg·LZT+0.5mg·LTDZ和0.5mg·LCPPU+0.5mg·LZT+1.0mg·LTDZ诱导愈伤率较高达100%；以1/2WPM+0.5mg·LCPPU+1.0mg·LZT+0.5mg·LTDZ,其诱导愈伤组织50d后转接平均分化芽数最多达10.26个。不定芽形成后，不切割转接于继代培养基上。经过4周培养，在不定芽基部长出许多小的不定芽，形成不定芽丛。把丛生芽分割成2-3个为一丛的芽丛，转接到培养基中进行继代培养，6周左右可继代增殖1次。
Nickerson(1978)、Cohen（1980）等的研究证明2ip，即f6一(3一甲基一2一丁烯基氨基)嘌呤对试管越橘有增殖幼枝的作用。陈慧都研究结果显示选用玉米素（最适浓度为0.5-1mol/L）接种单芽茎段外植体可迅速萌芽长出幼枝，试验品种为半高丛越橘的‘Northsky','Northblue’以及矮丛越橘的‘Blomidon'.'Brunswick'4个品种。刘庆忠等人对对6个北高丛越橘品种和2个南高丛越橘品种通过研究表明，在改良WPM附加玉米素0.5-2.0mg/L的增殖培养基上，增殖倍数达50倍以上。
1.4试管苗生根培养
以往的越橘微体繁殖研究,一般均在试管外生根或在弥雾条件下扦插试管幼枝生根。研究结果显示最佳生根培养基的激素组合1/2WPM+0.1mg/LBA+0.3mg/LNAA生根率可达42.9%。 3/5 首页 上一页 1 2 3 4 5 下一页 尾页 |
