| 以幼叶作外植体进行培养时萌动能力较弱，即使延长培养时间也不萌动，并且开始褐变死亡，经两代培养后死亡率达到80%；老叶的污染率低，萌动率高，但死亡率也很高，并且愈伤组织及芽的诱导比较困难，出现少量的愈伤组织，但在以后的培养中始终维持这种状态不变，成苗率的几率很低；茎尖在培养过程中表现最佳，污染率、死亡率相对均较低，能迅速成芽，节处逐渐膨大，有愈伤块产生，萌动率很高，达到了79%同时污染率也比较低。
对外植体进行低温预处理可以减少褐变的发生，由于低温抑制多酚氧化酶的缘故，可使外植体处于旺盛的生长状态，减少了褐变的发生。研究表示低温处理的那部分枝条萌动的多，褐变的少，萌动率为60%，褐变率为36.7%，而未低温处理的那部分枝条萌动的少，褐变的多，萌动率为40%，褐变率为70%。黄文江等人以7个北高灌蓝莓和2个南高灌蓝莓为试材，从田间健康生长的植株上剪取带壮芽的休眠枝条,室内插瓶水培催芽,待芽突破鳞片露出绿芽时,把枝条剪单茎段。研究结果显示，采用室内水培催芽,以萌动的芽为原始材料建立无菌苗,其污染率低,最高不超过5%,成苗率高,95%以上的芽能抽梢形成正常的绿苗。
董朝莉采用两种外植体的灭菌方法（1）75％酒精浸泡10s，无菌水冲洗3次，0．1％升汞浸泡10min，无菌水冲洗5次；（2）75％酒精浸泡10s，无菌水冲洗3次，12％H2O2浸泡10min，无菌水冲洗3次，0．1％升汞浸泡10min，无菌水冲洗5次。研究表明初代培养污染率较高，以茎或叶作外植体的污染率均在50％以上。以叶片为外植体污染率高于用茎作外植体，增加H2O2灭菌程序对加强灭菌效果不明显，且对外植体严重杀伤。
1.1.3培养基的选择
1983年Wolfe比较了7种培养基，发现Lloyd和McGown的WPM(WoodyPlantMedium)培养基效果最好。一般培养的类型均以RowlandLJ等的改良WPM基本培养基。改良的WPM基本培养基(Lloyd和Mc-Cown,1980),添加玉米素0.5-2.0mg/L。制备改良培养基时用Ca(NO)·4HO684mg/L、KNO190mg/L、CHFeNNaO73.4mg/L和盐酸硫胺素0.1mg/L,取代原WPM培养基中的KSO、CaCl、FeSO和NaEDTA。
大量研究结果表明，植物激素的种类和配比是决定形态发生启动和分化方向的关键。WPM培养基是木本植物组织培养应用最多的培养基之一。目前越橘组织培养多选择WPM培养基和改良的WPM培养基。马艳丽(2005)以4种越橘的不同外植体为试材，配合4种培养基进行越橘组织培养试验，结果表明:改良MS培养基对高丛越橘(Vacciniumcorymbosum)组培效果较好，再生频率达75.0%;改良WPM培养基对半高丛(Vacciniumcorymbosum/angusifolium)和矮丛越橘((Vacciniumangusifolium)分化增殖效果较好，再生频率达85.3%和79.2%;改良knops培养基比较适合兔眼越橘(Vacciniumashei)的培养，再生频率85.0%。
不同种类的植物生长调节剂在组织培养过程中具有不同的作用，而不同种类的激素之间的组合也会有不同的效果。在以叶片为外植体研究过程当中，Sharon(1988)采用WPM培养基附加10-15um2ip诱导伯克利(Berkeley)和‘Bluehaven’无菌苗叶片再生，4周后，叶片不定芽的再生率高达70-100%。Rowland等于1992年对建立越橘叶片再生体系进行了研究中得出，复合型细胞分裂素玉米素核甘(ZTR)要比自由型的细胞分裂素如ZIP或ZT在越桔叶片再生方面的效果好。1992年，Lisa报道用20uM的玉米素核普比15uMZip更能有效诱导出不定芽，诱导率可提高5倍，所用材料为高丛越橘无菌苗的叶片。Rowland(1994)等于1992年又对建立越橘叶片再生体系进行了研究，实验中添加20umol/LZT的处理与加入15umol/L2ip的处理不定芽分化率比值是6:1。Filipenya以蔓越橘为材料，建立再生体系，研究试验表明l/2WPM添加1mg/L2iP+0.5mg/LTDZ或5mg/L2iP+0.2mg/LTDZ具有最高的不定芽再生率，而且该条件下诱导的不定芽丛在无激素的培养基上伸长生长频率最高。
在以茎尖为外植体的研究过程当中，董朝莉采用改良WPM为基本培养基，研究越橘的组培育苗技术。结果表明：以兔眼越橘当年生绿枝茎段为外植体可有效获得无菌苗；越橘茎段的离体增殖率受到培养基中细胞分裂素的调控，ZT1-2mg/L和2ip10-20mg/L的效果较好。 2/5 首页 上一页 1 2 3 4 5 下一页 尾页 |
