| 用2.0％的琼脂糖凝胶，120V电压，电泳1h，用凝胶成象系统照像。
依据RAPD标记所获基因片段序列，运用PrimerPremier5.0软件设计SCAR引物（5'ATTCGAAGGTTGGGATGGAG3'/5'TAGCAGAAGTGACAAGAGGT3'），用所设计的引物对两亲本和构建的抗病池、感病池以及建池单株进行扩增。
2结果与分析
2.1亲本抗性评价
表3亲本抗性评价
Table3Theresistanceestimationofparents
|
品种
Variety
|
病害类型
Types of
disease
|
病情指数 (DI)Disease index
|
抗性级别
Level of
resistance
|
表现型
Pheno
-type
|
|
2006年
2006a
|
2007年
2007a
|
2008年
2008a
|
平均
Average
|
|
秦冠Qinguan
|
褐斑病
brown blot disease
|
15.4
|
17.0
|
16.5
|
16.3A
|
3
|
MR中抗
|
|
斑点病
alternaria leaf blotch
|
7.7
|
6.5
|
8.4
|
7.5A
|
2
|
R 抗病
|
|
富士
Fuji
|
褐斑病
brown blot disease
|
37.8
|
40.4
|
38.6
|
38.9B
|
4
|
S感病
|
|
斑点病
alternaria leaf blotch
|
30.8
|
33.4
|
35.9
|
33.3B
|
4
|
S感病
|
注：“A、B”示显著水平(P、B”Meanssignificantat1%leve
对于两种病害富士叶片3年的平均病情指数明显高于秦冠（表3所示），褐斑病是秦冠的2.3倍，斑点病是秦冠的4.4倍，差异达到极显著水平。秦冠对两种病害的抗性明显高于富士，依据抗性标准秦冠属于（2-3级）抗病品种，富士属于（4级）感病品种。
2.2杂交F代病害侵染规律及不同年份发病情况
表4苹果杂交F代不同年份间抗病性的相关分析(2006～2008年)
Table4Thecorrelationanalysisofdiseaseresistancein2006-2008
|
组合
The combination
of parents
|
病害类型
Types of
disease
|
2006年/2007年
2006a/2007a
|
2006年/2008年
2006a/2008a
|
2007年/2008年
2007a/2008a
|
|
秦冠×富士
Qinguan×Fuji
|
褐斑病
Brown blot disease
|
0.8548
|
0.7943
|
0.8269
|
|
斑点病
Alternaria leaf blotch
|
0.8683
|
0.8249
|
0.8355
|
|
富士×秦冠
Fuji×Qinguan
|
褐斑病
Brown blot disease
|
0.8329
|
0.8116
|
0.7817
|
|
斑点病
Alternaria leaf blotch
|
0.8968
|
0.8882
|
0.9175
|
|
两种病害的相关性
Correlation between two disease
|
ns
|
ns
|
ns
|
注：++代表极显著相关性P=0.01，+代表显著相关性P=0.05,ns代表没有显著相关性。
Notes：++,+,nsrepresentsignificantcorrelationatP=0.01,correlationatP=0.05,andnocorrelation,respectively.
苹果褐斑病主要侵染植株中下部老叶片，7-8月份出现高温多雨季节是褐斑病高发期，此时叶片开始脱落，植株不同基因型个体的抗感性明显表现出来；斑点落叶病菌主要侵染苹果新稍叶片，5-6月份出现一个侵染高峰，8-9月份是发病盛期，因此寄生在秋稍叶片上的分生孢子到9月份遇到高温多雨时大量繁殖，此时叶片上的病斑明显表现出来。不同年份间病害发生的相关性达到显著或极显著水平（表4），尤其是斑点病的相关系数3年间都达到极显著水平，说明在不同年份间植株的抗性表现比较稳定，但是由于受到环境因素的影响，极少部分植株的抗性表现会有所变化。杂交F代对两种病害的抗性没有显著的相关性，初步认为，这两种抗病基因不连锁，位于同一染色体相对较远的位置，或位于不同的染色体上。
2.3杂交F代抗病性遗传变异分析
 
图1苹果杂种F代病情指数分布图
Fig1DistributionofaveragediseaseindexofFprogenies
由图1可知，杂交F代褐斑病和斑点病的病情指数呈连续性变异（植株抗性表型变异并不连续），不符合标准的正态分布规律，属于数量遗传中的阈值性状。因此秦冠富士两个苹果品种杂交组合对褐斑病和斑点病的抗性是受多基因控制的数量性状，但是各等位基因对抗性的贡献大小是不均等的（图1所示），存在明显的峰值，即苹果对褐斑病和斑点病的抗性是主效基因和微效多基因共同作用的数量性状。
表5抗病性遗传分析
Table5Theinheritanceanalysisofdiseaseresistanceng
|
杂交组合
Crossing
combination
|
病害类型
Types of
disease
|
株数
Plant
No
|
亲中值
MP
value
|
病情指
数均值
The average
of DI
|
变异
系数
CV
(%)
|
组合传递力
(%)
Combination
heritability
|
超亲比率（%）
Transgression rate
|
|
超高亲
Ultra high
parent
|
低于低亲
Ultra low
parent
|
|
秦冠×富士
Qinguan×Fuji
|
褐斑病
Brown blot disease
|
385
|
27.6
|
27.9±18.38
|
72.4
|
99.3
|
32.9
|
20.6
|
|
斑点病
Alternaria leaf blotch
|
322
|
20.4
|
20.0±13.8
|
89.3
|
98.5
|
23.7
|
22.7
|
|
富士×秦冠
Fuji×Qinguan
|
褐斑病
Brown blot disease
|
385
|
27.7
|
36.1±25.4
|
67.8
|
130.0
|
38.4
|
18.4
|
|
斑点病
Alternaria leaf blotch
|
322
|
20.4
|
20.1±15.2
|
75.6
|
98.6
|
28.5
|
20.9
|
注：病情指数取2006-2008年平均值.Note:Diseaseindexistheaveragevalueof2006-2008years.
杂交F代抗病性发生广泛分离，表型丰富，病情指数变异系数较大（表5所示）。F代的褐斑病平均病情指数高于亲中值，组合传递力为114.6%，表明褐斑病遗传中非加性效应占有较大比重，杂交后代由于非加性效应解体，抗病性有降低的趋势，超高亲率比较高。F代的斑点病平均病情指数接近亲中值，组合传递力为98.5%，表明秦冠与富士杂交后代抗斑点病的遗传主要受加性效应控制，基因加性方差贡献大，能较稳定的遗传给后代，在F代中选择抗病单株的潜力大。
2.4抗斑点病基因RAPD分子标记
从325个RAPD随机引物中挑选在双亲间具多态性的68个引物，在亲本、抗病和感病DNA池中扩增，发现有18个（26.5%）引物可以扩增出稳定可重复的多态性条带。其中S428-900这个差异条带在秦冠及抗病DNA池中出现，而在富士及感病DNA池中没有出现，因此初步判断S428-900与抗斑点病基因相连锁（图2）。
图2引物S428对亲本和抗病池、感病池DNA扩增的结果
M：DNAladder;P1:秦冠;P2:富士;R:抗病基因池;S:感病基因池;1-7:感病单株;8-14:抗病单株
Fig.2PCRamplificationresultsofthePrimerS428inparents,resistantandsusceptiblepools
M:DNAladder;P1:Qianguan;P2:Fuji;R:Resisrantpool;S:Susceptiblepool
1-7:Susceptibleindividuals;8-14:Resisrantindividuals;
用引物S428对秦冠×富士组合的2个亲本及71个后代杂种展开扩增。 2/4 首页 上一页 1 2 3 4 下一页 尾页 |
