论文摘要：为了探讨缓慢降温抑制采后鸭梨果实褐变的机理，研究了不同降温方法对不同成熟度鸭梨果肉脂氧合酶（LOX）活性及膜脂脂肪酸组分和含量的影响。结果表明：在贮藏期间，LOX活性缓慢上升，晚采果活性较高；缓慢降温抑制了LOX活性的升高，对早采果影响明显。鸭梨果肉中含有月桂酸、豆蔻酸、棕榈酸、棕榈油酸、珠光酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸，其中含量较多的是亚油酸、棕榈酸和油酸。推迟采收和缓慢降温提高了果肉的U/S值，缓慢降温提高了鸭梨果肉的亚麻酸及前期的亚油酸含量。贮藏后期，随着LOX活性的升高，亚油酸、亚麻酸的含量减少，二者可能是LOX的反应底物。
论文关键词：鸭梨,降温方法,成熟度,果肉,脂肪酸
植物细胞膜由于其类脂的组成随环境变化而变化，从而表现为动态的生物膜。许多植物在受到非冷害低温处理后，其抗性将会增加，这就是所谓的冷锻炼或冷驯化现象，植物在冷驯化过程中发生了一系列生理生化变化，其中非常重要的是膜脂组织的变化。Yamaki等认为，脂肪酸的不饱和度与膜的相变有密切关系，不饱和膜脂含量高时，膜流动性大，膜的相变温度较低；反之膜的流动性小，相变温度较高。关于果实采后膜脂脂肪酸与果实抗冷性及成熟衰老的关系，资料不是很多，目前在桃、香蕉、苹果、猕猴桃、‘Anjou’梨等果实上有相关报道。
鸭梨的缓慢降温在生产上已经被推广使用，并取得了很大的效益，从采后的12℃入库，经过30～50d进入0℃贮藏，这其实就是一种冷锻炼或冷驯化，资料报道，一些植物如菠萝叶、冬黑麦、冬燕麦和春燕麦都有冷驯化提高不饱和脂肪酸含量，从而降低膜脂相变温度的报道。而在鸭梨上至今还没有关于脂肪酸组分及含量以及与冷驯化关系的报道，本实验研究了不同降温方法对不同采收成熟度鸭梨采后膜脂脂肪酸组分及含量的影响，以期找到缓慢降温抑制鸭梨果实褐变的膜证据。
1材料与方法
1.1材料
实验所用鸭梨采自北京大兴安定镇后安定村，树龄15年，早采和晚采果分别于2005年9月8日和9月28日采摘。从固定的八棵树上随机手工采摘中等大小、无虫害、无机械伤的果实，套网套装入纸箱中运抵实验室，再次挑选后装入专用包装纸箱中，上部用PE膜覆盖，每箱装30个果，每个处理共装12箱。急降温处理果直接放入0±1℃冷库中贮藏；缓降温处理果放12℃冷库中，每5d降2℃，用30d时间将温度降至0±1℃贮藏，RH80～85％。对于不同处理及果实不同部位采用以下缩写名表示：早采急降果肉—ZJR，早采缓降果肉—ZHR，晚采急降果肉—WJR，晚采缓降果肉—WHR。
1.2方法
1.2.1脂氧合酶(LOX)活性测定
参照罗云波方法，略加改动。底物的配制：0.25mLTween-20，加蒸馏水10mL，亚油酸0.5mL，加1MKOH至清亮，加入45mLpH7.4硼酸缓冲液，用1MHC1调到pH=8.6，用蒸馏水定容到100mL。LOX抽提液：用50mMpH6.8的磷酸缓冲液，加1％Tritonx-100和1％PVP。酶液制备：称取4.0g冻样，加3mLLOX酶提取液，于0℃下提取1h，于0～4℃下10,000×g离心25min，放0℃备用待测。酶活性测定：50mM磷酸缓冲液（pH6.8）2.7mL，底物200μL，25℃下保温10min，加入酶液100μL，立即记时，在234nm下记录0min～2minOD值的变化，以50mM磷酸缓冲液（pH06.8）为空白。酶活性用△OD/min.mgpro表示。
1.2.1组织膜脂的提取方法
总类脂及极性脂的提取方法参考Bligh等和苏维埃等方法，加以改进。
总类脂的提取：准确称取10.0g果肉、果心和果皮组织，在100℃热杀10min灭酯酶，冷却至室温后用氯仿：甲醇（1∶2v/v）30mL研磨，再用氯仿：甲醇（1∶2v/v）30mL洗研钵，转入100mL烧杯中放1.5h提取，用砂芯漏斗抽滤，用20mL氯仿洗漏斗及抽滤瓶，合并滤液转入100mL分液漏斗中，加20mL0.76%NaCl溶液（使氯仿：甲醇：水＝1：1：0.9），充分振荡分为两层后，下层减压浓缩蒸干（42℃），得到总类脂。
极性脂的提取：总类脂溶于6mL饱和甲醇的石油醚（沸点90～120℃），再加入饱和石油醚的甲醇，充分振荡后静置，放出下层甲醇相，再用6mL饱和甲醇提取上层2次，将3次甲醇相合并，用6mL饱和石油醚清洗甲醇相，把甲醇相减压浓缩蒸干，得到不含中性脂的极性脂。
1.2.2组织膜脂脂肪酸的测定方法
膜脂脂肪酸的测定参考Bligh等和Saquet等方法，加以改进。
极性脂的甲酯化：取极性脂300μL，N吹干，加2mLKOH-甲醇（色谱纯）和2mL苯-石油醚（1∶1）充分振荡后静置15min，加入16mL蒸馏水振荡后静置至溶液清晰分层，将上清液吸出并用N吹干，加80μL正己烷放－18℃冰柜中，尽快测定，测定时取1μL上气谱测定。气谱条件：用北京分析仪器厂制造SP-3400气相色谱，DB-23（60×ID.0.25mm×0.25μm，美国Agilent公司制造），采用程序升温方式，柱初温130℃，保持1min，以6℃/min升到215℃，保持2min，再以40℃/min升到230℃，保持40min。其中进样口温度250℃，检测器（FID）温度270℃。实验中所用的标准脂肪酸为月桂酸、豆蔻酸、棕榈酸、棕榈油酸、珠光酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、花生酸、花生烯酸、花生四烯酸和廿二碳五烯酸为美国Sigma公司产品。
1.3数据分析
用Excel2000统计分析所有数据，计算标准误并制图；用SPSS11.0软件进行方差分析和显著性检验。 1/3 1 2 3 下一页 尾页 |
