论文摘要：通过单因素和多因素实验，采用响应面实验设计方法对金佛手果叶多糖最佳提取工艺进行了研究，结果表明：多糖最佳提取组合是提取时间是247min，温度是91℃，料液比是1：64，此时1g金佛手果、叶粉多糖得率分别是4.542和1.776g/100g。可靠性验证实验表明，上述提取方法的优化条件是可靠的。
论文关键词：金佛手,提取,多糖,优化
佛手（bergamot）又名九爪木、五指橘、佛手柑，学名citrusmedicaL.var.sarcodactylis(Noot.)Swingle，属芸香科柑橘属香橼的变种，常绿小乔木或灌木。我国佛手的主要栽培地区有广东、福建、四川、浙江等，其中浙江金华佛手品质最为优良，最为著名，被称为“果中之仙品，世上之奇卉”，雅称“金佛手”。研究表明，佛手全身都是宝，其根、茎、叶、花、果均可入药，入肝、脾、胃三经，有理气化痰，止咳消胀、舒肝健脾和胃等多种药用功能。而决定其药效作用的是其所含的丰富的多糖等天然产物。
多糖（polysaccharides）是由多个单糖分子缩合、失水而成，是一类具有广泛生物活性的生物大分子物质，又称多聚糖，它是维持生命活动正常运转的基本物质之一，广泛分布于植物、动物和微生物中。多糖在自然界分布很广，尤其是高等植物多糖和食用真菌多糖具有多种生物活性和相对毒性较低的特点，引起医学界的广泛关注。已有大量报道指出，多糖具有免疫调节作用、肿瘤抑制作用、抗心肌缺血及降低血糖等作用。
多糖大多数是以氢键、盐键等与其它多糖或物质聚合在一起，提取多糖必须以各种有效方法破坏多糖链与其它物质的共价结合。有关广佛手多糖分离提取已有报道，但迄今鲜见有关于金佛手多糖最佳提取方法研究方面的报道，为此本实验对金佛手果叶多糖进行提取研究，并采用了较先进的响应面分析方法对提取方法进行优化，为金佛手果叶的开发利用提供理论依据。
1材料和方法
1.1仪器和试剂
仪器：HH.S11-2型数显电热恒温水浴锅；UV-2450型紫外可见分光光度计；AB104-S标准型分析天平；常规冷凝装置；手提式高速中药粉碎机；旋转蒸发仪。
试剂：丙酮、无水乙醚、正丁醇、三氯乙酸、无水乙醇等，均为分析纯。
1.2材料来源
本实验所用材料金华佛手的果和叶片系由浙江金佛手农业开发有限公司提供。
1.3方法
制样：将新鲜洗净晾干后的金佛手切成均匀薄片，放入托盘，于60℃鼓风干燥，自然冷却后粉碎过100目筛备用。将新鲜佛手叶洗净，晾干，于60℃鼓风干燥至衡重，自然冷却后粉碎过100目筛，置棕色瓶中保存备用。
本实验采用硫酸－苯酚法测多糖的含量。
标准溶液的配制：准确称取标准葡萄糖12mg，溶解后，定容于500ml的容量瓶，摇匀。得0.024mg/ml的葡萄糖标准溶液。待用。
标准曲线的绘制：取上述葡萄糖标准液0ml、0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml，分别置10ml具塞试管中，各加蒸馏水至2.0ml，加入新配制的6％苯酚溶液1.0ml，再迅速加
入7.0ml浓硫酸，置冷水中放置5min，摇匀。置沸水浴中加热15min，取出用冷水迅速冷却，以0#为参比，在紫外可见分光光度计于490nm处测定吸光度，测量三次，取平均值。以多糖质量为纵坐标，吸光度为横坐标，绘制标准曲线，得标准方程为Y=25.957X－0.0058，R=0.9997。
多糖的浸提方法及含量测定：精密称取已用石油醚脱脂去杂质后的佛手果粉0.5g，加入一定体积蒸馏水，采用水浴回流加热法提取，设定回流时间、提取温度、料液比，在各试验水平提取条件下进行浸提，过滤，稀释至250ml。准确吸取样品溶液0.5ml，置10ml具塞试管中，用蒸馏水补至2.0ml，分别加入6％苯酚溶液1.0ml摇匀，迅速加入浓硫酸7.0ml置冷水中放置5min，摇匀，沸水浴加热15min，取出用冷水迅速冷却，取2.0ml蒸馏水于10ml具塞试管中，代替葡萄糖标准溶液，即为空白溶液，在490nm波长处测定各样品吸光度，测量三次，取平均值。由标准曲线计算样品溶液中的多糖含量（g/100g）。
2结果与分析
2.1单因素实验
2.1.1温度的影响在料液比1：20，回流时间1h时，不同提取温度对佛手多糖提取率的影响，结果见表1。从表可以看出，多糖得率随着温度升高而逐渐增加，当温度90℃之后提取率增加相对缓慢，从节约能源等方面考虑，故选择90℃为宜。
表1提取温度对多糖得率的影响
Tab1Effectoftemperatureontheyieldofthepolysaccharides
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提取温度(℃)
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60
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70
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80
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90
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100
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多糖得率 (g/100g)
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1.931
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2.234
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2.294
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2.336
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2.343
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2.1.2料液比的影响在回流时间1h，提取温度90℃的条件下，不同料液比对佛手多糖提取率的影响，结果见表2。由表可以看出，提取一次的条件下，多糖得率随料液比的增加而增加，但当料液比为1：60之后，提取率增加相对缓慢，考虑到后续的实验操作和减少消耗能源，我们选择料液比为1：60为宜。
表2料液比对多糖得率的影响
Tab2Effectofratioofliquid-solidontheyieldofthepolysaccharides
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料液比(V:W)
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1：20
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1：30
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1：40
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1：50
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1：60
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1：70
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多糖得率 (g/100g)
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2.323
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2.351
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3.312
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3.402
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3.807
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3.818
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2.1.3提取时间的影响在提取温度90℃，料液比1：60时不同回流提取时间对佛手多糖提取率的影响结果见表3。 1/3 1 2 3 下一页 尾页 |
