| 生长素与细胞分裂素的比例决定着发育的细胞类型，以及愈伤组织再分化的方向。不同激素及其浓度会诱导不同的形态发生过程。由于调节剂的种类和用量因培养目的的不同差异很大，不同物种的细胞内生激素的数量也不一样，为了优化南果梨茎尖生长增殖系统，本研究做了10种激素浓度和配比试验。在培养条件相同，接种茎尖、腋芽基本一致条件下，观察其增值和生长情况（见表5）。
表5BA与NAA不同配比对南果梨茎尖生长增殖的影响
Table5EffectofdifferentregulatorcombinationsonshoottipinductionanddifferentiationofPyrusussuriensisMaxin
|
序号
|
激素种类，浓度（mg/L）比例
|
接种茎尖数（个）
|
30d后增殖茎尖数（个）
|
30d后茎尖增殖系数
|
30d后茎尖生长量（cm）
|
|
BA
|
NAA
|
BA/NAA
|
|
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
|
0.5
1.0
1.5
2.5
3.5
4.0
5.0
4.0
3.5
4.5
|
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.4
0.3
0.3
|
2.5
5
7.5
12.5
17.5
20
25
10
11.7
15
|
40
40
40
40
40
40
40
40
40
40
|
104
144
148
140
108
80
72
176
142
118
|
2.6
3.6
3.7
3.5
2.7
2.0
1.8
4.4
3.55
2.95
|
0.9
2.4
1.7
1.6
1.1
0.8
0.5
1.8
1.65
1.3
|
结果表明:(1)茎尖的生长增殖对细胞分裂素和生长素的浓度及其配比有一定要求。从表5可以看出，当BA浓度为4.0mg/L、NAA为0.4mg/L时，茎尖增殖系数最大；当BA浓度为1.0mg/L、NAA为0.2mg/L时，茎尖生长量最大。但茎尖的最大生长于增值量的获得需要一定的细胞分裂素与生长素的比例，即当NAA浓度一定时，随BA浓度增大，达到一个峰值，随后BA浓度越大，越不利于茎尖增殖与生长；当BA浓度一定时，增大NAA浓度则有利于茎尖生长与增值。
2.5外源激素对组培苗诱导生根的影响
试管苗在培养基上生长1周后，在基部有愈伤组织形成，两周后有白色幼根生成，3周后有些根上会长出次生根，根色有白色转变为淡黄色。试验结果见表6。
表6IBA、GA对试管不定苗生根的影响
Table6EffectsofdifferentregulatoronrootdifferentiationofplantletsofPyrusussuriensisMaxin
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激素种类、浓度（mg/L）
|
接种茎段数
|
始发根天数（d）
|
生根苗数（株）
|
40d生根率（%）
|
|
IBA
|
GA
|
|
0.8
|
|
12
|
|
|
|
|
1.0
|
|
14
|
|
|
|
|
1.2
|
|
13
|
18
|
1
|
7.7
|
|
1.4
|
|
15
|
14
|
4
|
16.7
|
|
1.6
|
|
15
|
15
|
2
|
13.3
|
|
1.0
|
2.0
|
12
|
|
|
|
|
1.4
|
2.0
|
12
|
16
|
2
|
13.3
|
|
1.6
|
2.0
|
13
|
18
|
1
|
7.7
|
由表6可知，IBA为1.4mg/L时对生根的作用极显著高于其他浓度，IBA为0.8、1.0mg/L时未见有根的生成。而当GA3加入培养基中，不仅没有促进根的生成反而起抑制作用。在试验中我们还发现当IBA为1.6mg/L时，生出的根粗，生长缓慢，且发根率下降。因此，IBA为1.4mg/L时最适宜诱导生根。
2.6试管苗移栽基质的筛选
基质的选择对试管苗的移栽是很重要的，在瓶苗出瓶前，将瓶口打开晾苗，让苗健壮，3d后进行移栽，在以下各基质中各栽30株，30d后观察结果。结果见表7
表7不同移栽基质对试管苗成活率的影响
Table7Effectofdifferentmediumsonsurvivalrateofseedlingaftertransplanting
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序号
|
基质种类
|
移栽株数（株）
|
成活株数（株）
|
成活率%
|
|
1
|
珍珠岩：草炭土=1：1
|
30
|
25
|
83.3
|
|
2
|
河沙：草炭土=1：1
|
30
|
26
|
867
|
|
3
|
河沙
|
30
|
22
|
73.3
|
|
4
|
珍珠岩：草炭土：河沙=1：1：1
|
30
|
28
|
93.3
|
表7表明，4号基质（珍珠岩：草炭土：河沙=1：1：1）最适合南果梨的移栽。成活率可达93.3%。
3结论与讨论
利用组织培养的方法进行植物的快繁，其优点就是利用较少的外植体材料在短时间内获得大量的品质优良的脱毒再生植株，整个过程操作方便、快捷、节省人力物力，且不受外界环境条件的影响。具有极大的推广应用价值。
3.1结论
本试验从6个方面对南果梨的离体快速繁殖体系进行了研究。得到的结论是：最佳灭菌时间为8～10min；最适取材时间：春天（4月上旬）取材；最佳预处理是：GA0.1mg/L预处理一周；不同南果梨品种的茎尖增殖和生长能力不同；南果梨的最佳继代培养基为：MS+6-BA4.0+NAA0.4；最佳生根培养基为：1/2MS+IBA1.4；试管苗移栽的最适基质为珍珠岩：草炭土：河沙=1:1:1。
3.2讨论
建立高频稳定的离体再生体系，是繁育南果梨、保存南果梨种质资源、改良南果梨品质、获得转基因植株的先决条件之一。培养条件是限制南果梨离体培养的外在因素，主要包括激素的种类、浓度配比、pH值、温度、光照等，这些因素可作为诱导因子影响内源激素的水平，启动有关基因，直接或间接调节代谢，从而促进植物生长和诱导植物分化；内在因素主要指植物的基因型、苗龄、外植体的部位及生理状态等，它们对离体培养的影响主要归结为遗传因素和内在激素水平的不同。
1．南果梨品种
许多研究表明：植物的再生频率与基因型有很大关系。S.predieri等研究结果也表明，不同品种梨的叶片的再生频率有明显差异。李浚民认为：由愈伤组织再生完整植株显然是基因型特征。在离体培养条件，一个物种内并非所有品种都表现出同样的生长和分化能力。其原因可能是由于离体培养条件下的生长和分化受某些基因调控，而这些基因是参与细胞中生理生化的代谢基因。
2．外源激素的影响
组织培养中合适的激素配比是非常重要的，它关系到实验的成败与否。在芽增殖的培养基中，细胞分裂素是必不可少的，而且以6-BA对芽的大量增殖最为有效。生长素在大多数情况下用NAA或IAA，但浓度不易过高。有时还加进低浓度的GA，以促进芽的分化。在不同生长素和细胞分裂素的配合使用中，两者的比例十分重要。 3/4 首页 上一页 1 2 3 4 下一页 尾页 |
