| 幼苗在生根培养基上培养35d后，调查每瓶中的生根数，然后按不同处理得出平均数，并计算出生根频率。计算公式为：生根频率=生根苗率／接种苗率×100%。
1.2.6试管苗的炼苗移栽
当苗高2.5-4cm，苗根长2-3cm，根为乳白至黄色时，将锥形瓶的封口打开，将试管苗从瓶中取出，用无菌水将幼苗的根冲洗干净，然后移栽到基质中。先在原始培养条件下锻炼3-4d，然后逐步改变环境温度、光照条件，直到最终将它移至室温条件下，在珍珠岩中生长半个多月后，在移到土壤内。移栽后要保持湿度和避免阳光直射，并定期浇灌培养液。
本试验所用培养基均为pH值为5.8，含蔗糖3%、琼脂0.7%；培养条件均为25±2℃，光照2000Lx，12h光周期。
1.3实验参数
茎尖再生率= ×100%茎尖增殖率= ×100%
2.结果与分析
2.1不同灭菌时间对外植体成活率和污染率的影响
灭菌时间的长短直接关系到外植体的成活率与诱导率。时间过短，灭菌不彻底，污染率高，时间过长对材料细胞有伤害造成死亡。虽然污染率大大将低，但成活率很低。0.1%HgCl处理时间对接种的南果梨茎段污染率与成活率如表1所示。
表1.不同灭菌时间对茎段污染率与成活率的影响
Table1.Effectofsurvivalrateoftuberindifferentsterilizetime
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灭菌时间（min）
Sterilize time
|
接种瓶数(瓶)
Number of explant
|
污染率（%）
Stain percent
|
成活率（%）
Survival percent
|
|
6
|
30
|
53.3
|
46.7
|
|
7
|
30
|
23.3
|
76.7
|
|
8
|
30
|
16.7
|
83.3
|
|
9
|
30
|
3.3
|
96.7
|
|
10
|
30
|
0
|
100
|
|
11
|
30
|
0（3）
|
90
|
|
12
|
30
|
0（3）
|
90
|
| |
|
|
|
|
|
注：污染率=污染数/接种数，成活率=(接种数-污染数-灭菌灭死数)/接种数)。
从表1可以看出灭菌时间与污染率、成活瓶数有着直接的关系，时间过短，污染率高，时间过长对外植体细胞产生伤害，在6~12min内，随灭菌时间的增长，污染瓶数减少，成活瓶数增大。8~10min时的污染率较低。从实验结果分析来看，南果梨茎段的灭菌时间应控制在8~10min。
2.2基因型对南果梨茎尖增殖和生长的影响
植物茎尖增殖和生长能力受遗传控制，植物的基因型不同，其茎尖增殖和生长能力也不同。本试验对4个不同南果梨品种茎尖在5种增殖培养基上的生长效果进行了研究如表2所示。
表2不同南果梨品种茎尖增殖和生长结果
Table2Effectofregenerationabilityofdifferentspecies
|
品种
|
30d后最高茎尖增殖系数
|
30天后最高茎尖生长量（cm）
|
获得最高茎尖增殖系数培养基
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可增值和生长茎尖占接种茎尖比例（%）
|
|
小南果
清原大红南果1号
清原大红南果2号
清原大红南果3号
|
4.4
1.0
2.6
3.5
|
1.8
0.9
1.2
1.4
|
MS+BA1.5+NAA0.2
MS+BA4.0+NAA0.4
MS+BA3.0+NAA0.4
MS+BA2.5+NAA0.2
|
81.3
53.4
73.2
78.6
|
从表2可以得出结论：（1）南果梨基因型是决定茎尖增殖和生长的关键性因素。无性系小南果在适宜培养基上茎尖增殖系数高达4.4，茎尖生长量高达1.8cm，其他品种在适宜培养基上都可生长和增殖，但生长和增殖能力因品种不同而各异。
（2）不同基因型南果梨茎尖生长和增殖与内源激素种类和水平有关，因而不同南果梨基因型对茎尖生长和增殖的影响还表现在其对外源激素种类和浓度的要求不同。较低水平的BA和NAA能满足无性系小南果和清原大红南果3号最高茎尖生长量和增殖系数的要求，而品种清原大红南果1号和2号则需较高浓度的BA和NAA才能获得最高增殖系数和生长量。
2.3不同赤霉素(GA3)浓度预处理及取材时间对茎尖诱导率的影响
将春季和秋季取得的材料都进行了不浸泡直接接种、赤霉素浸泡、水浸泡三种处理，接种30d后调查茎尖的诱导率。观察发现接种在培养基上的茎尖，先是表面变为淡褐色，约4～5d后褐色褪去,茎尖顶端开始转绿，14d后，在叶腋长出新芽，21d新芽开始伸开，长成叶片，且长势良好。另外观察发现茎尖生长后会出现小老苗或褐变死亡现象，秋季取得的材料比春季取材更为明显。春季材料的各处理的诱导率均高于秋季取材的诱导率（见表3）。
表3不同预处理对茎尖诱导率的影响
Table3EffectsofGA3concentrationonshoottipinductionofPyrusussuriensisMaxin
|
春季茎尖诱导率
|
秋季茎尖诱导率
|
|
|
接 种
茎尖数
|
生 长
茎尖数
|
生长率
|
|
接 种
茎尖数
|
生 长
茎尖数
|
生长率
|
|
处理Ⅰ
|
20
|
11
|
55%
|
处理Ⅰ
|
20
|
0
|
0%
|
|
处理Ⅱ
|
20
|
17
|
85%
|
处理Ⅱ
|
20
|
5
|
25%
|
|
处理Ⅲ
|
20
|
12
|
60%
|
处理Ⅲ
|
20
|
0
|
0%
|
GA是一种重要的植物生长调节剂，它能打破植物的休眠，促进芽的萌动。为了进一步研究激素对茎尖生长和增殖的影响，我们对初春顶梢进行了不同浓度的GA预处理，结果见表4。
表4不同浓度GA预处理对茎尖生长增殖的影响
Table4EffectsofGA3concentrationonshoottipdifferentiationofPyrusussuriensisMaxin
|
GA 浓度（mg·L ）
|
茎尖生长增殖率（%）
|
|
0
0.05
0.1
0.2
|
41.2
61
84
73
|
结果表明：经GA浸泡处理后各取材时间的茎尖诱导率都有所提高。秋季取材时赤霉素处理比不浸泡和水浸泡的诱导率高出了25%，春季取材的赤霉素浸泡比不浸泡高了30%。在早春芽未萌动之前取材，一定浓度的GA预处理对茎尖生长增值城正相关，即在一定GA浓度范围内茎尖生长增殖率随GA浓度增加而增高。因此，在进行茎尖的离体培养之前，进行一定浓度的GA预处理，对茎尖的生长是有利的。
2.4不同种类、浓度的激素对南果梨茎尖增殖和生长的影响
生长调节物质是培养基中的关键物质，对植物组织培养起着不容忽视的作用，也是提高植物离体增殖生长的重要因素。 2/4 首页 上一页 1 2 3 4 下一页 尾页 |
