论文导读:：但茶皂素应用于水果采后保鲜领域未见报道。茶皂素与噻菌灵对柑桔绿霉的毒力相当。而噻菌灵对柑桔青霉的室内毒力要高于茶皂素。对柑桔绿霉病菌的抑制作用最强。大大限制了沙糖桔的运销[1]。导致采后品质易劣变和病害发展迅速。
论文关键词：茶皂素，噻菌灵，柑桔青霉，柑桔绿霉，沙糖桔，品质
柑桔采后损失主要是由病原真菌侵染造成，而柑桔青霉（Penicillium italicum）和柑桔绿霉（Penicillium digitatum）作为柑桔采后最重要的两种病害，严重制约着柑桔采后的贮运以及销售。沙糖桔（Citrus eticulate Blancocv.Shangtang）原产广东省四会市，果实味清甜，含糖量高，色泽鲜艳，皮薄易剥。然而由于其皮薄，含水含糖量高的特点，极易受机械伤和微生物侵染，导致采后品质易劣变和病害发展迅速。贮藏期相对其它柑桔类果实短农业论文，大大限制了沙糖桔的运销[1]。目前，柑桔贮藏期青绿霉病的防治主要依靠化学药剂[2]。噻菌灵作为一种高效、广谱、内吸性杀菌剂常被用于柑桔青绿霉病的防治，但随着药剂长期大量使用，菌株抗药性的问题日益严重，防治效果逐年下降[3]。
目前，许多研究报道植物源物质应用于水果采后病害的防治[4-5]，但植物源物质单独应用往往药效不如化学药剂，这就极大限制了这类化合物的商品化以及实际应用前景。茶皂素作为一种良好的植物源农药、天然表面活性剂以及环保型农药增效剂，已有研究表明其本身对多种植物病原菌具有良好的抑制作用，同时对多种农药具有很好的增效作用[6-10]，但茶皂素应用于水果采后保鲜领域未见报道。为了减少化学物质的施用量、克服化学药剂的抗药性以及提高茶皂素的防治效果，本文测定了茶皂素和噻菌灵混配对柑桔青霉和绿霉病菌的室内毒力以及增效比率，同时测定了混剂对沙糖桔采后青绿霉菌的防治效果及其对贮藏品质的影响，旨在为开发一类含有茶皂素的新型柑桔采后防腐保鲜剂提供理论依据。
1 材料和方法
1.1 试验材料
1.1.1 药剂
80%茶皂素原粉（Tea saponin）由湖南省辰溪县绿色技术制作所提供；95％噻菌灵原药（Thiabendazole）由黑龙江胜农科技开发有限公司提供论文发表。
1.1.2 果实
沙糖桔（Citrus reticulata Blanco cv. Shangtang）果实采于广东省四会市柑桔园，九成熟的新鲜的四会沙糖桔采摘后，当天进行处理，先用手工分选，齐根剪平果蒂，择除病、虫、破、烂、畸的个体，保证果实品种、成熟度和物理状态的一致性。
1.1.3 病原菌
病原菌分离于自然发病的沙糖桔果实农业论文，并经过纯化培养，形态结构分析及显
微观察证实为柑桔青霉（Penicillium italicum）和 柑桔绿霉（P. digitatum ），保存于本课题组。
1.2 试验方法
1.2.1室内生物活性测定方法
采用菌丝生长速率法[11]。通过预备试验筛选出各药剂的5个有效浓度，制成PDA平板，将直径6 mm的供试病菌菌丝块放置于含药培养基平板中央，每皿1块，用不含药的溶剂代替药液作对照，每处理3次重复，25 ℃培养3 d，测量菌落直径，计算抑制率，求出毒力回归方程及有效中浓度（EC50）。
1.2.2混配药剂增效配方的筛选
采用Wadley法进行筛选[12]。先配制单剂浓度梯度，再按相对应的浓度梯度顺序将两单剂按1:9、2:8、3:7、4:6、5:5、6:4、7:3、8:2和9:1的体积比混合，得到增效配比。计算出各单剂和混剂毒力回归方程Y＝a X+b和r值，求EC50。根据Wadley公式计算复配剂的增效比率（SR值）。
EC50（理论）=（a+b）/（a/EC50A+b/EC50B）
增效比率（SR）=EC50理论值/EC50实际值
式中A、B分别代表茶皂素与噻菌灵两种药剂组分，a、b是茶皂素与噻菌灵两组分在混剂中含量的比值。
根据增效系数SR作出联合作用综合评价。当SR大于1.5时为增效作用，介于0.5～1.5之间时为相加作用，小于0.5时为拮抗作用。
1.2.3 药剂混配对沙糖桔采后青绿霉病菌的防治效果
将经过挑选的大小均匀、无损伤的沙糖桔分为4组，每组3个重复，每重复30个。然后分别用制备好的200μg?mL-1和400μg?mL-1的茶皂素?噻菌灵混剂、200μg?mL-1的茶皂素和噻菌灵单剂的溶液和清水浸果2~3分钟农业论文，摊开、晾干。置于塑料筐中，用保鲜膜密封，以保持筐内的湿度。将沙糖桔置于25℃培养室内贮藏，贮藏时间为30 d。在贮藏30天时分别统计病、健果，发病率按下列公式计算：
发病率（％）=(病果数/供试总果数) ×100
1.2.4 果实品质测定指标及方法
在沙糖桔处理前和贮藏结束后，每组处理随机挑选15个果实分别进行以下3项指标的测定。测定重复3次，每次重复5个果实。其中，总可溶性固形物，采用手持式折光仪进行测定。抗坏血酸，采用2, 6-二氯酚靛酚法。可滴定酸含量，采用NaOH中和法，总酸含量以柠檬酸含量表示[13]。
1.2.5 数据统计分析方法
采用SAS软件(Version 6.08，SAS Institute Inc., Cary，NC)进行数据统计，试验结果用邓肯氏新复极差多重比较法（Duncan’s Muitiple RangeTest，DMRT）进行差异显著性分析(P<0.05)论文发表。
2 结果与分析
2.1茶皂素和噻菌灵混配对柑桔青霉和绿霉病菌的联合毒力
室内毒力试验结果表明，茶皂素和噻菌灵对柑桔青霉病菌菌丝生长抑制中浓度EC50分别为310.74 μg?mL-1和44.60μg?mL-1；而对柑桔绿霉病菌菌丝生长抑制中浓度EC50分别为26.76 μg?mL-1和23.80 μg?mL-1。由此可见，茶皂素与噻菌灵对柑桔绿霉的毒力相当，而噻菌灵对柑桔青霉的室内毒力要高于茶皂素。
复配试验结果表明，当茶皂素与噻菌灵配比为9∶1、8∶2和4∶6时农业论文，对柑桔青霉病菌菌丝有较强的抑制作用，增效比均大于1.5，表现为增效作用。其中配比为8∶2时，增效比值最大为2.77。当茶皂素与噻菌灵配比为8∶2和4∶6时，对柑桔绿霉病菌的抑制作用最强，增效比分别为1.60和1.51，均大于1.5，表现为增效作用（表1、2）。
表1 茶皂素和噻菌灵混配对柑桔青霉病菌的增效作用
Table 1 The synergistic effect of tea saponin and triabendazole against Penicillium italicum
|
配比
Ratio
|
回归方程
Regress equation
|
EC50
(μg? mL-1)
|
相关系数
Relative coefficient
|
增效比
Synergistic ratio
|
|
10∶0
|
y =1.3367x+1.6683
|
310.74
|
0.9591
|
—
|
|
9∶1
|
y=1.7843x+1.2685
|
123.39
|
0.9832
|
1.58
|
|
8∶2
|
y=1.8770x+1.7914
|
51.23
|
0.9793
|
2.77
|
|
7∶3
|
y=1.5689x+1.8996
|
94.67
|
0.9668
|
1.18
|
|
6∶4
|
y=1.6332x+1.6667
|
109.89
|
0.9765
|
0.83
|
|
5∶5
|
y=0.6977x+5.8280
|
65.05
|
0.9122
|
1.20
|
|
4∶6
|
y=1.4139x+2.7931
|
36.39
|
0.9534
|
1.86
|
|
3∶7
|
y=0.6618x+3.8569
|
53.37
|
0.9773
|
1.12
|
|
2∶8
|
y=1.2051x+2.8315
|
63.01
|
0.9805
|
0.85
|
|
1∶9
|
y=1.0616x+6.4738
|
40.90
|
0.9747
|
1.19
|
|
0∶10
|
y=1.7177x+2.1669
|
44.60
|
0.9851
|
—
|
表2 茶皂素和噻菌灵混配对柑桔绿霉病菌的增效作用
Table 2 The synergistic effect of tea saponin and triabendazole against Penicillium digitatum
|
配比
Ratio
|
回归方程
Regress equation
|
EC50
(μg? mL-1)
|
相关系数
Relative coefficient
|
增效比
Synergistic ratio
|
|
10∶0
|
y =3.1504x+0.5030
|
26.76
|
0.9694
|
—
|
|
9∶1
|
y=1.8890x+2.0951
|
34.50
|
0.9980
|
0.77
|
|
8∶2
|
y=1.5275x+3.1491
|
16.28
|
0.9885
|
1.60
|
|
7∶3
|
y=0.9000x+3.6444
|
32.08
|
0.9859
|
0.80
|
|
6∶4
|
y=1.1139x+3.6118
|
17.63
|
0.9769
|
1.45
|
|
5∶5
|
y=2.3818x+1.3683
|
33.48
|
0.9370
|
0.75
|
|
4∶6
|
y=1.1372x+3.6173
|
16.44
|
0.9820
|
1.51
|
|
3∶7
|
y=1.4708x+3.1280
|
18.74
|
0.9878
|
1.31
|
|
2∶8
|
y=1.3420x+3.2509
|
20.11
|
0.9848
|
1.21
|
|
1∶9
|
y=1.8342x+2.1537
|
35.62
|
0.9853
|
0.68
|
|
0∶10
|
y =1.1667x+3.3938
|
23.80
|
0.9674
|
—
|
2.2药剂混配对沙糖桔采后青绿霉病菌的防治效果
结合联合毒力试验结果，我们选取茶皂素和噻菌灵配比为8∶2的混剂进行了沙糖桔室内防治试验，结果如图1。当茶皂素和噻菌灵混剂（8∶2）在浓度为400 μg?mL-1时可有效抑制沙糖桔采后青绿霉病的发生，发病率仅为1.53%，显著高于单剂和清水对照（P<0.05）。当浓度均为200 μg?mL-1时，混剂发病率为10.35%，与茶皂素和噻菌灵处理组发病率差异不显著，但明显高于清水对照的86.59%（P<0.05）。
     
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