论文导读:：本文对不同光照强度和土壤含水量下栽培东魁杨梅幼苗叶片的总黄酮、总鞣质、总绿原酸和游离蒽醌的含量进行测定与分析。结果显示：不同光照强度下，总黄酮、总鞣质、总绿原酸和游离蒽醌的含量变化规律具有一定的差异，总黄酮的含量为1层＞0层＞2层＞3层；总绿原酸和总鞣质的含量均为0层＞1层＞3层＞2层；游离蒽醌的含量2层＞1层＞0层＞3层。全光照有利于总绿原酸、总鞣质的合成积累，1层遮阴有利于总黄酮的合成积累，2层遮阴有利于游离蒽醌的合成积累。不同土壤含水量下东魁杨梅叶片总黄酮、总绿原酸、总鞣质、游离蒽醌的含量变化规律存在一定的差异。总黄酮的含量是40%土壤含水量＞70%土壤含水量＞55%土壤含水量＞85%土壤含水量；总绿原酸的含量是40%土壤含水量＞85%土壤含水量＞70%土壤含水量＞55%土壤含水量；总鞣质的含量为85%土壤含水量＞40%土壤含水量＞55%土壤含水量＞70%土壤含水量；游离蒽醌的含量为85%土壤含水量＞40%土壤含水量＞70%土壤含水量＞55%土壤含水量。土壤水分供应充分有利于东魁杨梅叶片中总绿原酸、总鞣质和游离蒽醌的合成积累，但不利于总黄酮的合成积累；适宜土壤含水量有利于总黄酮的合成积累；轻度水分胁迫对次生代谢产物含量的影响不明显，中度水分胁迫可提高东魁杨梅总黄酮、总绿原酸、总鞣质、游离蒽醌等次生代谢产物含量的合成积累。
论文关键词：东魁杨梅，光照，土壤含水量，次生代谢，叶片
植物的次生代谢产物（plantsecondarymetabolites）是指植物中一大类并非植物生长发育所必需的小分子有机化合物，是植物在长期进化中对生态环境适应的结果，对植物在其生态系统中的生存起作用[1]。近年来，植物次生代谢物成为研究热点，已从多种植物体中提取分离到了黄酮类、生物碱类及苯丙素类等次生代谢产物，并将其应用于医药、农药、调味品、香料、颜料以及食物添加剂等领域。植物的次生代谢产物在植物体内的合成、积累是在植物具有相关基因的基础上经环境条件诱导作用的结果。目前许多研究表明，逆境胁迫可以显著促进植物次生代谢产物的合成，次生代谢产物在协调与环境的关系上充当着重要角色 。土壤水分含量的多少会影响次生代谢产物的种类和含量，如水分胁迫增加了干质量叶片中芦荟苷的含量[2]，促进银杏叶片中槲皮素含量的增加，却抑制芦丁含量的增加[3]。光是植物次生代谢产物形成好积累必不可少的条件，光照强度对植物次生代谢产物的积累作用不同，有的起促进作用，有的起抑制作用，不同植物次生代谢产物合成的最适光照强度也不同，如野生状态下，强光区生长的朝鲜淫羊藿的淫羊藿苷含量是弱光区的6.93倍[4]，弱光导致高山红景天中红景天苷含量急剧下降[5]。另外，温度、大气环境、海拔高度对次生代谢也有影响[6-9]。
杨梅[10]（Myrica rubra Sieb et Zucc.），杨梅科杨梅属 ，亚热带常绿果树，乔木。杨梅除了众所周知的果实是一种水果外，树皮具燥湿疗疮，涩肠止泻，活血止痛。主要的药用部位是叶片、树皮和果实。目前，对杨梅的研究除了研究杨梅的栽培技术外，主要集中在杨梅果实的保鲜技术，而对杨梅次生代谢产物的研究主要集中在贵州矮杨梅这个杨梅品种上。东魁杨梅（Myrica rubra cv. Dongkui ）发源于浙江省台州市黄岩区，果实之大世上罕见，是目前我国乃至世界上最大的杨梅，素有'杨梅王'之称。1998年东魁杨梅荣获“浙江省优质农产品金奖”，1999年获（北京）国际农博会名牌产品；近几年来在全国各地广为推广种植，是农村致富奔小康发展效益农业的特色产业。目前对东魁杨梅这一品种研究主要集中在东魁杨梅的优质高效栽培技术、嫁接技术、管理技术、果实保鲜技术等方面[11-14]，对东魁杨梅次生代谢产物的研究还未见报道。
本文通过测定不同光照强度和不同土壤含水量下东魁杨梅叶片中总黄酮、总绿原酸、总鞣质、游离蒽醌的含量，探讨东魁杨梅叶片的次生代谢产物含量对不同光照强度和不同土壤的响应，为东魁杨梅的进一步推广、开发和利用提供理论依据。
1 材料和方法
1.1 材料的采集和处理
2007年2月从浙江省台州市黄岩区（东魁杨梅原产地）购买东魁杨梅幼苗（已嫁接的），带回学校种在花盆中（每盆土壤重量均为10kg）。于2007年6月将幼苗分成8等份，每份5棵生物论文，，并对每一棵幼苗的同生群叶片进行标记，其中4份分别放在自然光下（光照强度为100%，即全光照）、覆盖一层遮阳网下（光照强度约40%）、覆盖二层遮阳网下（光照强度约18%）、覆盖三层遮阳网下（光照强度约6%）进行栽培，另4份均栽培在自然光照条件下，用称量的方法使它们的土壤含水量分别为85%（充分供水条件）、70%（适宜土壤含水量）、55%(轻度干旱)、40%（中度干旱）的土壤最大持水量，每隔一天称量分别补上它们散失的水分。50d后分别将标记的同生叶采下，迅速用保鲜袋封装，带回实验室，洗净，放入105℃的干燥恒温箱中杀青25min，然后转入80℃的烘箱干燥至恒重。干燥后用粉碎机将样品粉碎，并过0.25mm筛，放入干燥器中备用。
1.3 次生代谢产物的测定方法
1.2.1 总黄酮的提取和测定[15]
精确称取1.1处理备用的样品各0.1g，分别放入50mL的磨口回流瓶中，加入5mL无水甲醇，80℃水浴回流提取2 h，离心取上清液，定容至25 mL，取1 mL，置10 mL离心管中，加入4mL 0.1 mol·L-1三氯化铝-甲醇溶液，摇匀，以试剂空白为对照，在420 nm处测定吸光值。
1.2.2 总绿原酸的提取与测定[16]
精确称取1.1处理备用的样品各0.1 g，加入95%乙醇5 mL回流提取1.5h，离心取上清液，定容至25 mL，取1 mL，置25 mL容量瓶中，加入0.2 mol·L-1HCl定容至刻度，摇匀，以试剂空白为对照，在 324 nm处测定吸光值。
1.2.3 总鞣质的提取和测定[17]
精确称取1.1处理的样品各0.1 g，放入锥形瓶中，加入蒸馏水30 mL，用恒温电炉加热至微沸（加热过程中根据实际情况不断用滴管添加热的蒸馏水，防止干燥），30分钟后取下，待冷却至室温后过滤，取上清液，定容至10 mL，以试剂空白为对照，在 276 nm处测定吸光值。
1.2.4 游离蒽醌的提取和测定[18]
精确称取1.1处理备用的样品各0.1 g，加入氯仿5 mL，70℃水浴回流提取2 h，离心取上清液放入10mL离心管中，再70℃水浴加热使氯仿挥发，然后用0.5%醋酸镁-甲醇溶液定容至25 mL，摇匀，以试剂空白为对照，在498nm处测定吸光值。
1.3 实验数据的处理
实验材料的处理重复5次，数据测定重复3次，数据的处理采用Excel和SPSS11.5 for Windows 软件进行计算和分析。
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