| 对发生点状染色的果实的皮孔进行电镜分析发现，染色皮孔的形状大多不规则，皮孔愈合缝愈合不完善，皮孔边缘在皮孔周围翘起，愈合不完善(图2A)。果实皮孔的愈合程度与果实发育有紧密的关系，一般随着果实的发育，皮孔的发育处于愈合－裂开－再愈合－再裂开……的发育模式中[24]杂志铺，一旦当果实临近采收期时发育受到灌溉、降水、氮肥过多等条件的刺激，仍处于分裂的表皮皮孔周围细胞不能及时愈合，则容易导致果实皮孔的发育不完善。发育不完善的皮孔及表皮裂缝，往往为微生物的入侵、附着等提供良好的场所[25,26]。图2B是经过染色处理后未染色的果实皮孔。从图可以看出，未染色果实皮孔愈合缝良好，皮孔形状比较规则。皮孔周围表皮蜡质层分布也比较均匀。
为进一步分析果实表皮以皮孔为中心点状染色的原因，我们对染色处理后染色和未染色的果实皮孔的愈合缝进行了电镜分析。结果发现，染色皮孔的愈合缝均有明显的裂痕，呈现出没有完全愈合的特征（图2C），其皮孔边缘翘起比较明显（图2A）。相对于染色的皮孔边缘和愈合缝，染色处理后未染色的皮孔愈合缝愈合程度比较好（2D），皮孔边缘翘起也相对少（图2B）。因此，皮孔边缘尤其是皮孔愈合缝愈合程度的差异是造成皮孔染色与未染色的最主要结构差异。
图2E是果实染色处理后成片染色区的表皮。图2F是染色处理后没有染色的果实的表皮。对比二者差异发现，果实成片染色区的蜡质层裂缝比较明显，有明显未愈合的特点。没有发生成片染色的良好的果实表皮蜡质层也有明显的裂缝愈合痕迹，但这些愈合缝愈合程度较染色区大大提高，没有明显的未愈合的现象。
2.2 苹果苯胺兰染色部位与贮藏末期表皮病害部位的相关性
染色为0级的果实（1A）在0℃贮藏210 d后基本没有发生病害（图3A）。发生点状染色的果实在0℃贮藏210 d后部分果实出现了点状发病，这些点状病害基本上以染色的皮孔为中心（图3B）。这类果实病害的特征在于发病均以染色的皮孔为中心，然后向外扩展。这种果实的染色和发病特征，符合染色的皮孔组织结构发育不完善，愈合缝愈合不完善（图2A、2C），容易潜伏真菌等微生物的特征。因此，以染色皮孔为中心的果实的点状腐烂，也与果实发病皮孔的组织结构有关。换句话说，果实各种病害的形成，尤其是与果实表皮相关的病害，如表皮褐变、二氧化碳伤害、腐烂、虎皮病等，不仅仅与微生物的种类、数量、环境条件等因素有关[27]，还具有其自身结构基础发育方面的缺陷杂志铺，如表皮和皮孔发育的不完善，愈合缝愈合程度低等，这些果实自身的因素，为微生物在果实表面的潜伏、存活、致病等提供了良好的场所。
图2 扫描电镜下苹果表皮染色与未染色部位的结构（A:染色部位皮孔；B:未染上色部位皮孔；
C:染色部位皮孔愈合缝；D:未染上色部位皮孔愈合缝；E:染色部位表皮愈合缝；F:未染上色部位表皮愈合缝）
Fig. 2 Structure of apple fruit cuticlewith staining or free-staining under scanning electron microscopy.
(A: Lenticel being stained, 100X; B: Lenticelwithout being stained, 200X; C: the unhealed crack from stained lenticel, 300X;D: The healed crack from free-stained lenticels, 300X; E: The unhealed crackfrom stained apple cuticle, 200X; F: The healed crack from free-stained apple cuticle,200X)
图3 果实表皮染色部位在贮藏末期病害发生情况
（A：正常未发病；B：点状发病果实；C：二氧化碳伤害；D：腐烂）
Fig. 3 Diseases or disorders after coldstorage for 7 months of apple fruits being treated by aniline blue stainingpre-storage.(A: Flawless fruit; B: Fruit with spot-diseases; C: Fruit with CO2injury; D: Fruit with decay)
图3C为染色的果实在贮藏后期发生的二氧化碳伤害。该病害的症状为边缘清晰，发病部位凹凸不平，果皮干燥，紧贴于果肉表面。如图所示，该病害的一个显著特征是发生病害的部分均位于染色的部位以内，基本与染色部位吻合，而未染色的部位则都没有发病。从这个角度讲，果实染色可以用于预测果实二氧化碳伤害的发生。值得指出的是，这种二氧化碳伤害一般多发生在染色比较严重的三级果实中，即成片染色的果实表皮中。成片染色的果实，其染色区的表皮蜡质层分布极其不均匀，有较多的表皮裂缝没有愈合完全（图2E）。因此，果实因为二氧化碳伤害导致的表皮褐变，往往与果实表皮发育的不完善有关，这一点在发病果实表皮电镜照片中也可以发现（图4A）。
图3D是果实0℃冷藏210 d后发生腐烂病害的情况。该腐烂的症状与二氧化碳伤害不同，其发生病变的部位软化而不干燥，内部果肉腐烂。可以看出，腐烂的发生部位与染色部位非常吻合。染色意味着表皮或皮孔的发育不够良好，结合图4B的结果，即在愈合不好的裂缝部位存有大量的病原菌的孢子，可以认为引起腐烂的病原菌可能主要在发育不好的果皮和果实皮孔部位潜伏、存活，从而最终致病。
2.3 苹果贮藏末期几种表皮病害扫描电镜分析
图4A是果实发生二氧化碳伤害部位典型的皮孔电镜图。从该图可以看出，发生二氧化碳伤害的果实表皮没有光泽，表皮裂缝分裂严重（中部偏右裂缝明显），皮孔边缘翘起严重。所有的这些特征与染色的果实表皮和皮孔的特征极为类似。这表明，果实表皮的染色和二氧化碳伤害可能存在相同的结构基础。
图4B是果实腐烂部位初期电镜图。从图中不仅发现了明显的表皮裂缝杂志铺，在裂缝部位还发现存在有大量的病原菌的孢子。因此，引起腐烂的病原菌可能主要潜伏在发育不好的果皮和果实皮孔部位，从而最终致病。这也是染色重的果实腐烂率发生也重的主要原因之一。
图4 苹果贮藏末期发生表皮病害部位电镜分析
（A:二氧化碳伤害部位皮孔；B:腐烂部位表皮裂缝C:正常果实表皮；D:虎皮病部位表皮）
Fig. 4 Microscopy images of apple fruitcuticle with disorders or diseases after cold storage for 7 months
(A: Lenticels of cuticle with CO2injury, 200X; B: Cracks of cuticle with decay, 400X; C: Cuticle of normalfruit, 2000X; D Cuticle of apple fruit with superficial scald, 2000X)
图4C是正常未发生表皮病害的果实。从该图可以看出，0℃冷藏210 d后，正常果实表层蜡质层结成密密的小球，均匀的分布在果皮表面，覆盖完善，未出现明显的果实裂缝和凹凸不平的症状，有光泽。图4D是果实发生虎皮病部位的电镜图。从该图可以看出，发生虎皮病的果实表皮没有光泽，表面凹凸不平。尽管如此，发生虎皮病的部位并未出现明显的表皮裂缝或蜡质层愈合不完善的情况。这可能与果实虎皮病主要与该部位蜡质层的氧化分解、抗氧化能力降低有关，而与果实表皮及其蜡质层的结构关系并不明显。这可能也是虎皮病并不与染色表现出直接相关性的原因。
3 结论
本实验通过扫描电镜对比分析了苹果苯胺兰染色和贮藏后期几种表皮病害，发现：（1）苹果表皮苯胺兰染色部位往往存在皮孔发育不完善、表皮裂缝愈合不完善等质量缺陷，且该缺陷可以通过苯胺兰染色的方法显现出来；（2）苹果贮藏末期表皮病害部位表皮及其蜡质层同样存在皮孔和表皮裂缝愈合不完善的质量缺陷；（3）苹果苯胺兰处理后，发生染色部位往往与贮藏末期表皮病害发生部位相吻合。因此，苯胺兰染色可用于预测果实贮藏末期的病害的结构机理是：染色部位与病害部位存在共同结构基础，即发育不完善的表皮质量，该质量缺陷可用苯胺兰染色的方法在果实入贮前使其显现出来。
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