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韭菜组织培养研究进展_外植体-论文网

时间:2014-03-25  作者:刘宏敏,马培芳,张明

论文摘要:本文对韭菜组织培养中如何选择外植体及影响组织培养的主要因子进行了综述,对韭菜组织培养的发展前景作了展望。
论文关键词:韭菜,组织培养,外植体

韭菜(Alliumtuberosum.Rottl)别名草钟乳、起阳草,为百合科葱属多年生宿根草本植物。我国作为韭菜生产大国,常规育种方法诸如杂交育种、优势育种等因育种周期过长、品种间杂种优势不明显等,已不能满足韭菜生产需要。组织培养作为遗传工程中的一项综合性技术,能有效获得育种中间材料,为韭菜育种提供理想的外源受体,促进了基因工程在韭菜遗传改良上的应用,在韭菜育种中发挥出显著作用。早在1977年Zee等就已培养韭菜无菌苗幼叶获得了再生苗,但植物的再生频率较低。近年来,随着国内外对韭菜组织培养研究的增多,现已建立了高频韭菜植株再生体系,因此,采用组织培养方法加快育种进程是可行且必要的。同时,韭菜原种、原原种扩繁也需要对韭菜组织培养进行深入的研究。本文对近几年来韭菜组织培养的研究成果做一综述,以期加快韭菜育种进程。

收稿日期:接受日期:

河南省重点科技攻关项目(623010200)

稿件联系人:马培芳Tel:E-mail:pdsnkykyk@163.com

1.韭菜不同外植体诱导成再生植株的差异

1.1韭菜花器官的组织培养

韭菜花器官的不同部位分化能力有很大差异。王明耀等人采用MS培养基,对韭菜花茎(韭薹)、花盘、花柄和花蕾进行培养,结果显示花盘切块容易分化出新植株,花蕾和花柄受培养基中添加的植物激素影响较大,花茎不能分化出新植株。从而证实了韭菜花器官的不同部位虽然具有相同的遗传基础,但在组织培养诱导再生植株的表现上却各有不同,这可能与特定器官自身在植株生长发育过程中担当的角色和作用有关,生长发育较为旺盛的器官更容易经过组织培养而分化出新植株。郝建平等将韭薹未张开的花序培养在不同种类的培养基上,证实了植株激素对器官的分化有重要的影响。但是,愈伤组织对激素的种类和浓度要求并不十分严格,从而认为遗传性及生理状态在形态发生过程中所起的作用可能比激素更为关键。Nair等对山韭花蕾进行诱导,也得到了能够成活的再生植株。李勇等人采用花托进行组织培养,研究发现在MS培养基中加入不同种类的植物激素对增殖率和生根速率有较大的影响,在合适的条件下组培苗的成活率可达到95%以上。

1.2韭菜茎尖的组织培养

茎尖是韭菜脱毒组织培养中利用的外植体。饶月辉等人对韭菜品种791进行茎尖离体培养研究,结果发现韭菜茎尖长度影响愈伤组织的转化,茎尖越小(0.4-0.1mm),愈伤化程度越高,同时成苗所需时间越长,甚至难成苗。在MS培养基中,切取茎尖大小以0.2-0.4mm较适宜,脱毒效果也较理想。秦波等利用圣堂野生大叶韭菜的茎尖进行组织培养,在MS培养基中添加不同的植物激素,经过愈伤组织诱导和芽分化、增殖培养和生根培养阶段,获得了大量生根苗,且每一小苗可长出3-5条根。

1.3韭菜根尖的组织培养

Shuto等利用韭菜的根尖(0.2-0.3mm)进行组织培养,在MS培养基中经过诱导愈伤组织和芽和根的分化形成了再生植株,证明了韭菜根尖是培养植株再生的优良外植体。张松等人的研究证明,韭菜根尖在MS+NAA1mg/L+BA2mg/L培养基上可一次成芽,芽分化频率高达65.4%-83.7%,出芽数达40.1-46.7个。该研究还对品种、苗龄等影响因子进行了比较,找到了愈伤组织和不定芽的分化频率较高的品种,还发现7-10日苗龄的根尖外植体最适于脱分化和再分化。王桂英以韭菜种子萌发后根尖及继代组培苗根尖材料为外植体,以MS为基本培养基同时附加不同种类和浓度的植物激素进行组织培养,研究表明BA、KT和NAA配合使用利于根尖材料芽分化,种子根尖比继代组培苗根尖诱导愈伤形成及芽分化相对容易。屈二军利用韭菜种子胚根为外植体诱导获得愈伤组织,并验证了在MS+NAA(1mg/L)+6-BA(2mg/L)的培养基上愈伤组织形成率最高,这点与张松等人的研究一致。

1.4其他外植体的组织培养

利用韭菜鳞茎及未传粉子房进行组织培养的研究也已有报告,贾芬等利用韭菜幼苗的鳞茎在MS培养基中诱导培养出愈伤组织,并进一步分化出芽和白色不定根,成为完整植株。田惠桥等用韭菜未传粉子房在改善的MS培养基中从胚囊中诱导出单倍体植株,同时还证明韭菜反足细胞的胚胎发生频率高于卵细胞。

2.影响韭菜组织培养的因素

2.1影响韭菜组织培养的内因

植物细胞的全能性是韭菜组织培养的基础,遗传性及生理状态在形态发生过程中起着重要的作用,不同品种和植株不同器官的转化率和转化时间存在较大的差异,因此基因型和器官的生理状态是影响韭菜组织培养的内因。

2.2.1基因型的影响

张松等人采用14份材料研究了不同基因型不定芽分化的差异,结果显示所有材料的根尖外植体均能产生愈伤组织和分化不定芽,但是培养时间、愈伤组织的分化频率、出芽率和不定芽分化数目均有差异,其中91-8品种的愈伤组织和芽的分化频率最高,均达到83.7%,出芽数也最多,平均为46.7个。

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