马克斯克鲁维发酵饮料的研制

1.3发酵基料的制备：

将Ⅱ级菌种液，无菌条件下接种于发酵瓶（罐）培养液中，25-35℃条件下，静置发酵三天，然后在20℃的条件下静置后发酵三天。

1.4成分检测：

1.4.1营养及活性成分检测：将上述方法制备的发酵基料，应用下列各种方法进行检测，以获得相应数据：蛋白质用凯氏定氮法；脂肪用灰烬法；还原糖用滴定法；微量元素用原子吸收法（A.A.S）测定（仪器：中国北京产WFX-ID型原子吸收仪）；维生素用原子发射光谱分析法（A.E.S）测定（仪器：美国Thermo Electron公司产WP-I型）；氨基酸用氨基酸分析仪（A. A. A ）测定（仪器：日本HITACHI公司生产，spectro fluorophotometer shimadzu RF-5000型）；SOD用黄嘌呤氧化没法-NBT还原法测定（仪器：美国产Variam HPLC-5000）；低聚糖、脂肪酸、黄酮类化合物用高效液相色谱法测定（HPLC）测定（仪器：美国varian HPLC-5000）。

1.4.2毒理学检测：用上述基料的300倍浓缩液（将发酵基料混匀，经JY99-2D型超声波破碎机作用10min×3次，浓缩后分装250毫升瓶115℃处理10分钟，使用前用PBS液1：1稀释，成分检测，有效成分含量为其原液的300倍），以wistar大鼠和昆明小鼠为实验对象，进行了小鼠急性毒性实验、大鼠急性毒性实验、小鼠骨髓微核实验、小鼠精子畸形实验、致畸实验和３０天喂养实验。

1.5.1降血糖试验：应用上述基料的细胞破碎混合液（将发酵基料混匀，经JY99-2D型超声波破碎机作用10min×3次）、原液（将发酵基料经滤布过滤的滤过液）、原液的50%稀释液（原液与水1：1稀释），依照《保健食品检验与评价技术规范》之《辅助降血糖方法》（中华人民共和国，2003年版），对四氧嘧啶尾静脉注射造模的昆明种小鼠进行试验。免费论文网。（选取其血糖值高于10mmol/l的高血糖小鼠分成模型对照组、细胞破碎混合液组、原液组、50%稀释液组、药物降糖组，共5组，每组12只动物。其中模型对照组给与日常饮水，其余分别给与发酵基料的细胞混合液、原液、50%稀释液和12倍人标准用量的降糖药液，每日20ml。光照条件下常规喂养、连续30天。检测其血糖值、比较各组动物血糖值及血糖下降百分率）。

1.5.2抗脂肪沉着试验：应用上述三个浓度发酵基料为实验材料，依照《中华人民共和国真菌类保健食品评审规定》中《减肥功能检验方法》，将Wister大鼠随机分为空白对照组、模型对照组及三个受试样品组（发酵液细胞破碎混合液组，原液组，50%稀释组）。自试验开始，实验组每组动物给予等量相应的受试样品，空白对照组和模型对照组饮以普通自来水。除空白对照组外，其余各组都饲以高能量饲料。试验45天后，剖腹取体脂（睾丸及肾周脂肪垫）并称重，测量统计实验期间的摄食量、食物利用率（食物利用率=增重/摄食量×100%）体重增长、体脂值、计算体脂比。以模型组为对照，对各实验组数据进行t检验，比较三组减脂效果。

1.6均质、脱气、调配：将上述方法制备的马克斯克鲁维发酵基料在均质机压力为30-35mpa的条件下，均质处理10分钟，再在50℃左右，真空度为0.5mpa的条件下脱气30分钟，然后按营养成分检测结果和产品设计指标进行勾兑和调味。

1.7过滤、灌装

1.8检验、包装、入库

2.结果与分析

2.1工艺流程：

2．2营养成分分析：见下表。

2．3发酵基料的卫生毒理学检验分析：

2．3．1.小鼠急性毒性试验：送检样品小鼠经口急性毒性试验结果ＬＤ５０大于10.5g/kgＢＷ，属无毒级。

2．3．2.大鼠急性毒性试验：送检样品大鼠经口急性毒性试验结果ＬＤ５０大于10.5g/kgＢＷ，属无毒级。

2．3．3.Ames试验：用平板掺入法，送检样品剂量达到5000μg/皿，加或不加S-9混合液对标准测试菌TA97、TA98、TA100、TA102试验结果为阴性。

2．3．4.小鼠骨髓微核试验：送检样品剂量达到10.0g/kgBW小鼠骨髓微核试验结果为阴性。

2．3．5.小鼠精子畸形试验：送检样品剂量达到10.0小鼠精子畸形试验结果为阴性。免费论文网。

2．3．6.30天喂养试验：送检样品剂量达8.3g/kgBW（相当于人体可能摄入量的300倍），经30天喂养，动物的一般形态（外观形态、活动、大便性状等）、摄食、生长状况良好；各项血液指标、血清生化指标、重要器官脏/体比值与对照组比较，经统计学处理差异无显著性意义（P＞0.05），各主要脏器病理组织学检查均未见异常改变。

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