论文摘要：采用牛津杯抑菌实验、最小抑菌浓度（MIC）的测定、DPPH自由基清除率的测定对香花枇杷和普通枇杷的不同萃取部分进行了抑菌效果和抗氧化活性的研究，结果表明：总体上，香花枇杷和普通枇杷相比，活性成分有较大的相似性，但具有更好的抑菌效果与抗氧化活性，可能存在潜在药用价值，有着较为广阔的发展前景。
论文关键词：香花枇杷,普通枇杷,叶片提取物,抑菌,抗氧化
我国是世界上最主要的枇杷生产国，且有丰富的枇杷属野生种质资源。批把叶为蔷薇科植物枇杷EriobotryaJaponca(Thunb.)Lindl.的叶，性平，味苦，入肺，胃经，是传统的止咳平喘常用中药，有化痰止咳、和胃降逆的功效。现代药学测验，批把叶的化学成分结构多样，含有皂苷、苦杏仁苷、乌苏酸、齐墩果酸、蹂质、维生素B、维生素C等，这些成份具有抗炎、止咳、降血糖、抗病毒和抗肿瘤等药理活性。
近年来，由于天然提取物的安全优势，从植物中提取活性物质是天然物质研究的热门课题。而自然界的天然植物中存在许多生理活性物质，如具有抗菌作用、抗氧化作用等，这可为植物源天然食品防腐剂、抑菌剂和抗氧化剂的研究和开发提供了宝贵资源。但目前对枇杷叶的抑菌作用存在着很多争议，需要做进一步的研究。
我国原产的枇杷属植物有16个种(21个种类)，其中人工栽培的只有普通枇杷1种，其余的均零星分布在大山上，多处于野生状态，香花枇杷即为一种分布较广的野生枇杷。目前，对普通枇杷叶片的活性及成分的研究较多，而对野生的枇杷属植物其它种类的相关研究却近乎空白。本论文通过野生香花枇杷和人工栽培普通枇杷叶片提取物的不同溶剂萃取部分的抗菌和DPPH自由基清除率实验，以期比较这两个种类的抑菌和抗氧化活性，探讨香花枇杷潜在的药用价值。
1材料与方法
1材料与方法
1.1材料
1.1.1主要原料
香花枇杷（EriobotryafragransChampexBenth）叶片采自广州三角山，普通枇杷（EriobotryajaponicaLindl.）叶片取自华南农大园艺学院果园。收集清理后室温晾干，粉碎得叶片干粉。
1.1.2测试菌株：
金黄色葡萄球菌（G）；大肠杆菌（G）、沙门氏菌（G）、绿脓杆菌（G）、变形杆菌（G）；白色念珠菌（酵母菌）；木霉。以上菌株由龙岩学院微生物实验室分离、保存。
1.1.3菌种培养基
细菌：牛肉膏蛋白胨培养基；酵母：酵母培养基（YPD）；霉菌：马铃薯培养基（PDA）。
1.1.4主要仪器和药品、试剂
仪器：DHP-9272型电热恒温培养箱，RE52-9型旋转蒸发器，SHZ-3型循环水多用真空泵，96孔板，牛津杯
药品和试剂：DPPH（1,1-二苯-2-苦肼基，批号085K1471）购买于Sigma公司；刃天青（批号RR7017）购买于合肥博美生物科技有限责任公司，其他试剂均为分析纯。
1.2方法
1.2.1材料的提取、萃取及除杂
取香花枇杷、普通枇杷叶片干粉各4.5kg，分别用95%乙醇浸提，提取液减压浓缩至无醇味（剩下水为溶剂），通过过滤将沉淀（脂溶性部分）与上清液（水溶性部分）分开，分别以石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，减压浓缩去除溶剂，得沉淀各萃取部及剩余部分，以及上清液各萃取部及剩余水相部分。
1.2.2香花枇杷和普通枇杷不同萃取样品的抑菌实验
采用牛津杯抑菌实验法。对香花枇杷和普通枇杷各萃取样品材料用二甲基亚砜（DMSO）配制成浓度为20mg/mL。各菌株活化后配置成菌悬液，终浓度为10～10个/mL，各取0.1mL涂布于适合各菌生长的培养基平板上。然后在各平板上放置2个牛津杯，一个供样品加入，一个供对照液（DMSO）加入。用微量移液器在各牛津杯上加入配置好的样品液和对照液各100uL，加好药液后，将平板放入培养箱培养，细菌37℃，酵母、霉菌30℃培养24h。实验重复三次，测定各样品所形成的抑菌圈大小，取平均值。
1.2.3香花枇杷和普通枇杷不同萃取样品最小抑菌浓度（MIC）的测定
对香花枇杷和普通枇杷各萃取样品材料用二甲基亚砜（DMSO）配制成浓度40mg/mL，采用试管二倍稀释法进行梯度稀释，各梯度浓度分别为40、20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156mg/mL。以刃天青为指示剂，研究各样品的最小抑菌浓度（MIC），具体方法如下。
准备无菌96孔细胞培养板，每孔依次加50uL适合各菌株生长液体培养基、培养24h活化后菌液5uL（菌浓：10～10个/mL）、不同梯度的各提取样品溶液55uL、0.25g/L刃天青指示剂5uL。将96孔板放置在厌氧条件下培养，细菌37℃，酵母、霉菌30℃培养24h。以刃天青为指示剂，通过观察孔中的颜色变化判断不同提取样品溶液是否有抗菌活性，浓度最低的一孔样品溶液剂量即为该样品的最低抑菌浓度（MIC）。同时，配置80mg/mL的山梨酸钾作为阳性对照，测定山梨酸钾的最低抑菌浓度（MIC）。
1.2.4香花枇杷和普通枇杷不同萃取样品抗氧化活性的测定
采用DPPH自由基清除率研究萃取样品的抗氧化活性。1,1-二苯基-2-苦肼基自由基（DPPH）分析法是用分光法进行定量分析筛选自由基清除剂的简便方法。萃取物对DPPH自由基的清除率（Thepercentageofscavengingradicalcapacity）SR%的计算方法参考许申鸿等的方法，由于在测定体系中样品本身的OD值很低（），因此忽略不计，计算公式简化为：SR%=(A-A)/A×100%。 1/3 1 2 3 下一页 尾页 |
