论文导读：本文主要介绍使用NC-800农残速测仪检测蔬菜农药残留流水步骤及需要注意的事项，该方法只能检出农残超标与否，不能准确定量某种农药超标。
关键词：蔬菜-农药残留-检测方法
原 理
NC-800农残速测仪采用酶抑制法，依据国家标准GB/T5009.199-2003《蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测》和行业标准NY/448-2001《蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测方法》，能快速检测出被测样品的农药残留，广泛应用于蔬菜、水果、粮食、茶叶、水及土壤中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测，适用于各级农业检测中心、生产基地、农贸市场、超级市场、学校、卫生部门、环保部门、宾馆、酒家等领域。
在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制乙酰胆碱酶的活性，其抑制率与农药的浓度呈正相关。在正常情况下，酶催化底物水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度随一定时间的变化值，来计算出抑制率，通过抑制率的大小可以判断样品中是否有高剂量的有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。
说明：
1、抑制率(%)= ；ΔAc为3min测量对照的吸光度变化值，ΔA 为3min 测量样品吸光度变化值。
2、即抑制率越大样品中农药残留量越高，抑制率越小样品中农药残留量越低。
3、该方法只能定性判断农残超标与否，不能准确定量某种农药超标。判断方法：①抑制率≤40%时，农残不超标；②抑制率在40～50%之间时，可疑农残超标；③抑制率≥50%时，农残超标。
4、当抑制率＞40%，需重复2次以上检测，并且重复检测的重现性在80%以上。
 试 剂
1、 pH8.0缓冲液：分别取11.9g无水磷酸氢二钾与3.2g磷酸二氢钾，用1000ml水定溶。
2、 乙酰胆碱酶：根据酶活性，用缓冲液溶解；要求3min吸光度变化ΔA值控制在0.4～0.8之间；0～5℃保存，保质期 4 天。
3、 底物：25.0mg硫代乙酰胆碱用3.0ml水溶解；0～5℃保存，保质期 2 周。
4、 显色剂：200mg二硫代二硝基苯甲酸，用25ml缓冲液溶解；贮存在西林瓶中，0～5℃保存，保质期 2 周。
说明：配制试剂时，①未作特别注明的试剂均指分析纯试剂；②未作特别注明的实验用水均指三级纯水。
操作步骤及应注意事项
1、取样：在目标田块采用以下方法提取样品：
对角线法、梅花点法、盘式法、蛇形(S形)法，重量因情况而定(1—3公斤)。
取样时，只取可食部分,每个样品必须用取样袋分开装入，不能用手直接抓取待测部分；将单个样品放在经清洗无污染的器皿上、绝不能将样品裸露堆放在地板上，以免污染，影响测量值。
2、仪器准备：(1)新器皿用8%硝酸溶液浸泡24小时后，先用自来水冲洗2次，再用洗涤剂刷洗，用自来水再次冲洗6次，最后用纯水清洗3次。⑵直接接触样品器皿的洗涤，先用自来水冲洗3次，再用洗涤剂刷洗，用自来水再次冲洗6次，最后用纯水清洗3次。⑶仅接触待测液器皿的洗涤，可用自来水再次冲洗6次后，用纯水清洗3次。
洗涤用纯水使用时，遵循“少量多次”原则；即每次用水量不要过多10-15ml即可，清洗次数不少于3次；特殊器皿洗涤按特殊要求处理；如农残定量分析时，按上述方法洗涤后还要用丙酮清洗。所需器皿均烘干后待用。
调试移液枪:可调移液枪2.5ml和0.1ml（100ul）,将枪嘴先用清水冲洗再用纯净水冲洗，在电子天平上进行吸液量校正，通过调节枪尾高度控制活塞行程，使吸液容量达到标称要求，电子仪器通电待机。
3、试剂配制：(1)缓冲液，先用少量（100-150ml）的纯水缓缓倒入放有缓冲剂干粉的量杯中，用玻棒搅拌完全溶解后倒入2000ml以上容量容器中然后加进纯水至1000ml处充分搅拌(摇匀)待用；(2)显色液，用移液枪吸缓冲液注入显色剂瓶中，盖上盖摇匀待用，缓冲液用量根据显色剂瓶身说明操作。(3)酶液，用另一移液枪吸缓冲液注入酶剂干粉瓶中盖上盖摇匀待用缓冲液用量根据显色剂瓶身说明操作。(4)底物, 用另一移液枪吸纯水3ml注入底物干粉瓶中盖上盖摇匀待用，纯净水用量根据显色剂瓶身说明操作。
4、解样：将生产基地或市场取回的样品进行分解
⑴整个过程控制在10min内完成(对单个样品而言)；一般样品不需要洗涤，当表面有泥土时，可洗去泥土甩干水后再取样。
⑵取样时，因蔬菜品种和个体大小的差异分别对待，一般取样量控制在100～150g之间(便于复测或气相色谱和液相色谱确证)，未用完的样品冷冻保存。
①大叶蔬菜(如青菜、大白菜等)：把取出的8～10片叶样每片从中对分，弃去一半，把留下的另一半从中拦腰截断，每2-1/4片叶样分别取其上、下部分弃去，用留下部分制样；如果制得的样品量仍然较多，充分混匀后，弃去多余部分即可。
②小叶蔬菜(如韭菜、豌豆尖等)：要增加取样量，并以整株为取样单元，整体取出100～150g用于制样。
③大块茎、瓜果蔬菜(如萝卜、茄子等)：减少取样个体为4～6个，把每个样品用刀顺切成4份，弃去对角2份，把留下的部分从中拦腰截断，每2份样分别取其上、下部分弃去，用留下部分制样；如果制得的样品量仍然较多，充分混匀后，留出100～150g用于制样后弃去多余部分即可。
④小块茎、瓜果蔬菜(如青豆、葱头等)：要增加取样量，并以整株或整颗为取样单元，整体取出100～150g用于制样。
⑶样品装瓶上标签（时间、产地、品种、编号，如20100412tjmyws01即2010年4月12日台江梅影莴笋01号）待用，每瓶150g，置于冰柜冷藏，便于复测用。
5、样品液：将样品瓶中取2g样品放入50ml三角瓶并用20ml吸液管吸20ml缓冲液注入瓶中，在恒温振荡器上振荡(浸提)2-3min以后，为避免受浓度、渣滓影响测量值，取出浸提液后用滤纸先将浸提液3-5ml滤丢，然后再将浸提液滤入经清洗、烘干无水渍的三角瓶中备用，滤渣丢弃。
6、用不同吸液枪分别给对照比色皿加注缓冲液(2.5ml/皿)、样品色皿加注样品液(2.5ml/皿)，和酶液0.1ml/皿、显色液0.1ml/皿。
用2.5ml用吸液枪2.5档，0.1ml用吸滤枪100ml档，加注酶液、显色液时枪咀对准液皿中间悬空快速加注(避免酶液或显色液因加注时粘上皿身或枪嘴而未与样品液或对照缓冲液充分混合导致因浓度变化影响测量值)，两液通过冲击力与缓冲液和样品液均匀混合，加注样品液时不同样品必须换枪咀。根据测量需要，对照组要多制4-6个。
7、将对照液皿与样品液皿作标记同时放入37℃恒温水浴锅中（水温以插入浴锅中的温度计实际温度为准），加热20分钟取出放置室温30分钟。
8、先将对照组2-4个置于速测仪上迅速悬空加注0.1ml底物进行ΔAc值测量，对照ΔAc值值度在0.3-0.8之间且各个对照相差值≤0.02说明速测仪性能稳定，所测值准确。否则说明测试仪不稳定或操作不正确。
9、将对照液与样品液同时放入速测议皿座上，迅速分别给液皿悬空加注0.1ml底物（提前加注或忘记加注均使样品液、对照液报废），合上速测仪盖进行检测。3分钟后，记录读数（抑制率）。
注：(1)抑制率≤40%时，农残不超标；(2)抑制率在40～50%之间时，可疑农残超标；(3)抑制率≥50%时，农残超标。
(4)当抑制率＞40%，需重复2次以上检测，并且重复检测的重现性在80%以上。
附注：
1、文中加粗字体即为应注意事项
2、文中内容属本人在实际操作中整理，若有雷同，纯属偶然。
3、文中若有不足之处，敬请同行指正。
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