论文导读：而且细胞培养过程中的费用是其他细胞类型（如酵母和大肠杆菌）发酵培养过程花费的5-10倍。所以需要克隆和表达人源胃蛋白酶用于毕赤酵母商业生产重组胶原蛋白。
关键词：重组胶原蛋白，酵母，转基因动物和植物，脯氨酰羟化酶
原胶原α链在翻译后立刻运输到内质网内腔被P4H羟基化，每条a 链大约有100个脯氨酸发生羟基化作用，每个发生羟基化的脯氨酸出现在Gly–X–Y的Y位置。论文大全。例如, 在I型人源胶原蛋白中，羟基脯氨酸与脯氨酸总数的比率大约是0.46 [3] 。如果缺乏羟基化的脯氨酸, 在生理温度下，胶原蛋白基本的螺旋构象是热不
稳定的 [4] 。所以生产热稳定性的重组胶原蛋白需要高水平的表达胶原蛋白并且有足够的P4H活性来催化其
羟基化。
重组胶原蛋白已经在哺乳动物细胞 [5–10] 、昆虫细胞 [11–15] 、酵母 [16–21] 、大肠杆菌 [22] 、 转基因烟草 [23–26] 、小鼠 [27,28] 和蚕 [29] 中得到表达。在各种重组表达系统中，只有哺乳动物细胞在转染胶原蛋白基因而不转染P4H基因的情况下，可以表达充分羟基化的胶原蛋白 [11–15] 。胶原蛋白在哺乳动物细胞中的表达水平从0.6到20 mg/l不等，在昆虫细胞中最高可以达到40 mg/l 。然而, 这种表达水平对大规模的商业化生产来说太低，而且细胞培养过程中的费用是其他细胞类型（如酵母和大肠杆菌）发酵培养过程花费的5-10倍。而在其它的重组表达系统中, 遇到的一个普遍问题是宿主细胞不能提供足够的P4H活性来充分羟基化胶原蛋白。一种多基因表达技术已经用来共表达胶原蛋白和P4H，并且已有利用多基因表达技术以毕赤酵母为宿主细胞表达胶原蛋白的报道。
2.2在酵母中的表达
2.2.1 在酵母中的表达
重组I–IV, VII, IX, XIII,XV和 XVIII型胶原蛋白已经在毕赤酵母中与P4H得到共表达 [19–20] 。在商业化生产中，初期III型胶原在毕赤酵母中的表达水平是15 mg/l [19] 。论文大全。通过遗传干涉、发酵条件优化、工艺过程开发等方面的研究，现在某些胶原蛋白类型的收率已超过1 g/l。毕赤酵母中表达的胶原并不分泌到细胞外基质而是在细胞内积聚
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