论文导读：目前测定甲基汞的方法主要是高效的分离技术将甲基汞与其他形态的汞的分离，然后利用各种高灵敏的具有元素选择性的检测手段进行测定。其中HPLC-ICP-MS样品前处理方法简单，相对干扰少等，操作简单快捷特点，被越来越广泛的应用。本文用碱体系-微波萃取-HPLC-ICP-MS技术测定了干红虾中的甲基汞的含量，结果较满意。
关键词：微波萃取，碱体系，HPLC-ICP-MS，甲基汞
1引言
汞（Mercury，Hg）是对人类和其他高等生物最具有毒害作用的元素之一.汞及其化合物的其生物化学行为和毒性与他们的化学形态密切相关[1]。不同形态的汞的毒性是不同的，有机汞的毒性大于无机汞的毒性，在有机汞中，又以甲基汞的毒性最大。甲基汞在水生生物中，特别是鱼体内富集，含量可达到总汞量的80%-100%，并通过食物链传递[2]。除了职业暴露以外，食用水产品是人类被甲基汞危害的主要途径。震惊世界的水俣病事件就是由于当地人们食用了甲基汞污染的鱼而造成的中毒[3]。因此，建立有效快捷的汞形态的分析方法测定水产品中甲基汞的含量是十分重要的。
生物样品中基质比较复杂，容易影响样品提取效率。在甲基汞的分析过程中，提取和分离汞化合物是最关键的步骤之一[4]。碱解法是处理生物样品的常用的分析方法之一。
目前测定甲基汞的方法主要是高效的分离技术将甲基汞与其他形态的汞的分离，然后利用各种高灵敏的具有元素选择性的检测手段进行测定。主要的分离手段有气相色谱法（GC）、高效液相色谱法(HPLC)等等，主要的检测手段有电化学检测器（ECD）、原子吸收光谱法（AAS）、原子荧光光谱（AFS）、电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）等。其中HPLC-ICP-MS样品前处理方法简单，相对干扰少等，操作简单快捷特点，被越来越广泛的应用。
2.1仪器及材料
1100型高效液相色谱仪(美国Agilent公司)， 7500cx型电感耦合等离子体质谱(美国Agilent公司) ，KQ5200DE型数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司），MARS EXPRESS微波消解仪（美国CEM公司），Milli-Q纯水器（Millipore公司），GS-6型离心机（美国Beckman），PHS-3C 型pH计（上海康仪仪器有限公司）， 40 mL离心管。0.45μm微孔滤膜（上海兴亚净化材料厂），0.2μm滤头（德国MENBRANA公司）,精密pH试纸（上海三爱思试剂有限公司）、PEEK管（Φ=0.13mm）、专用三通阀（美国Agilent公司）
接口：用PEAK管（Φ=0.13mm）通过三通阀与质谱雾化器连接。
所有容器使用前均用30%的HNO3中浸泡过夜。
2. 2试剂和标准溶液
2.2.1试剂
氯化甲基汞、氯化乙基汞(德国Dr.Ehrenstorfer GmbH公司)，氯化汞(中国计量科学研究院)含汞：1000μg/mL，2-巯基乙醇（美国Merck公司），乙酸铵，甲醇（色谱纯），KCL，HCL（优级纯），KOH，CuSO4，KBr，H2SO4（色谱纯）,HNO3（色谱纯）, CH2CL2（色谱纯），氮气,
以上试剂不做特别说明，均为分析纯
2.2.2标准储备液的配制
氯化甲基汞、氯化乙基汞标准储备液用甲醇配成浓度为100ug/mL，无机汞标准储备液用超纯水配成浓度为100ug/mL，用聚乙烯瓶避光保存于4℃冰箱冷藏；
2.3仪器条件
2.3.1 ICP-MS工作条件
RF功率：:1500W (屏蔽炬灵敏度模式) ；雾化器：同心雾化器；雾化室：石英双通道；雾化温度 ：- 5℃；炬管：石英一体化；据采集模式：积分时间： Hg (205) 0.3 s,Bi(209)0.3 s；采样深度： 8.0 mm；载气流速：0.86 L /min；辅助气流速： 0. 40 L /min。
2.3.2色谱条件
色谱柱：ZORBAX XDB-C18(美国Agilent公司，2.1mm×50mm×5μm )；流动相：0.1%2-巯基乙醇，2%甲醇（V），0.06mol/L乙酸胺，经0.45μm微孔滤膜过滤，超声30min，脱气，备用；进样体积：20μL；流速：0.4mL/min;
2.3.3微波萃取条件
本实验微波仪采用温控程序，见下表1
表1 微波萃取程序
| 步骤 |
功率(W) |
Psi |
°C |
保持时间 |
| 1 |
1600 |
|
40 |
40 |
| 2 |
1600 |
|
50 |
20 |
2.4实验步骤
2.4.1溶液的配置
分别量取上述标准储备液各0.5 mL于50 mL容量瓶中，用二次水定容至刻度，配制成1ug/mL的标准工作液。用二次水逐级稀释，配制成浓度为0.5，1，2，4，10ng/mL的标准工作液。
2.4.2样品前处理
2.4.2.1碱体系-微波萃取提取方法
准确称取待测样品0.5g于微波消解罐中，加入25% KOH溶液6mL，按上述微波萃取条件1h,萃取结束后，将样品转移至50 mL离心管中，5000r/min转速离心15min，收集上清液。加入5mLCH2CL2,萃取MeHg,水平振荡器震荡30min， 4000r/min转速离心10min ，取下层有机相，再于水相中加入5mLCH2CL2，重复上述萃取过程，合并两次萃取的有机相溶液，加入10mLH20，充入氮气，使有机相蒸发，从而使甲基汞留在水相中，调节pH值至6.8。再次离心，收集上清液。转移至50mL容量瓶中，用超纯水定容至刻度。0.2um的滤膜过滤备用。
3结果与讨论
3.1标准曲线与线性关系
在实验浓度0.5，1，2，4，10ng/mL范围内，结果以峰面积A做纵坐标，浓度C做横坐标，绘制甲基汞的标准曲线，如下图所示：
图1甲基汞的标准曲线
由图1可知，该曲线的线性方程为A=452913C+25131,线性相关系数为r2=0.9993.线性较好，有较宽的线性范围
3.2方法检出限
以信噪比的3倍计算检出限。本方法的甲基汞检出限为0.2ng/mL。
3.3样品分析、加标回收率与精密度
样品测定3次，得甲基汞的平均测定值为0.039mg/kg，占干红虾中总汞量（0.05mg/kg）的78%[5]。总汞量由ICP-MS测得4。
本方法采用添加回收的方法添加相当于0.05 mg/kg水平的待测元素的标准溶液，按样品分析方法步骤操作，测定11次，计算回收率和精密度。加标回收率为72-85%，精密度为9.8%。
4 结论
本文用碱体系-微波萃取-HPLC-ICP-MS技术测定了干红虾中的甲基汞的含量，结果较满意。该方法具有前处理方法简单、样品溶解率高、甲基汞损失小等特点，结合ICP-MS操作简便快捷、灵敏度高等特点，能够满足进出口水产品中甲基汞含量的快速检测要求。
[1] Morel F M M, Kraepiel A M L, Amyot M.Annu.Rev.Ecol.Syst.,199829:543-566
2 康新民. 水俣病及汞害的防治.北京：人民军医出版社，1991：51-59
3 HaradaM.Critical Reviews in Toxicology,1995,25(1):1.
4孙瑾等. 超声波辅助溶剂萃取-电感耦合等离子字体质谱法测定生物样品中的总汞和甲基汞.光谱学与光谱分析，2007，27（1）：173-176
[5] 江津津等.水产品中汞与甲基汞风险评估的研究进展.食品工业科技，2007，28（11）244-246
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